N1大鼠骨髓源神經嵴祖細胞系
N1大鼠骨髓源神經嵴祖細胞系系作為源自大鼠骨髓的神經嵴譜系祖細胞模型,因保留神經嵴細胞te有的多向分化潛能與遷移特性,在神經發育調控、神經損傷修復及神經嵴相關疾病研究中具有du特jia值,成為探究神經嵴細胞生物學特性及應用的重要實驗工具。
細胞特性與來源背景:該細胞系源自大鼠骨髓基質細胞,經神經誘導分化和克隆篩選獲得。細胞形態呈典型的神經前體細胞樣,多為紡錘形或 bipolar 形,胞體大小均勻(長度約 40-60μm,寬度約 10-15μm),胞質呈弱嗜堿性,可見豐富的微管和神經絲,約 20% 細胞可見細長的神經突樣突起(長度可達胞體直徑的 3-5 倍),細胞核呈橢圓形,位于細胞中央,核仁清晰。生長方式為貼壁生長,呈放射狀或網狀排列,接觸抑制較弱,傳代后 24 小時貼壁率達 93%。核心參數符合神經嵴祖細胞特征:倍增時間約 48 小時,連續傳代 20 次后仍保持穩定的生物學特性;表面標志物表達du特,nestin 陽性率達 96%,神經嵴特異性標志物 p75NTR 陽性率 95%,SOX10 陽性率 93%,而造血細胞標志物 CD45 陽性率低于 2%;具有正常的二倍體核型(染色體數 42 條),無染色體畸變;多向分化潛能顯著,在神經元誘導培養基中培養 10 天后,β- 微管蛋白 Ⅲ(Tuj1)陽性率達 82%,突觸素(synaptophysin)表達量增加 7 倍;在施萬細胞誘導條件下,S100β 陽性率達 78%,髓鞘堿性蛋白(MBP)分泌量達 35ng/mL;在平滑肌細胞誘導環境中,α- 平滑肌肌動蛋白(α-SMA)陽性率達 75%;遷移能力突出,Transwell 實驗中 24 小時遷移率達 65%,受神經生長因子(NGF)誘導后遷移率提升至 85%;無微生物污染,細胞純度達 96%,保障實驗結果的可靠性。
科研應用價值:在神經發育研究中,N1 細胞經視huang酸處理 7 天后,神經嵴分化調控基因 SOX9 表達量增加 5.2 倍,神經突平均長度從 45μm 延長至 180μm,可模擬神經嵴細胞向神經元分化的早期過程,為解析神經嵴細胞命運決定機制提供理想模型。
神經損傷修復研究方面,該細胞與損傷脊髓組織共培養時,可向損傷區域遷移,遷移距離達 1.2mm,促進神經再生相關基因 GAP-43 表達量增加 4.8 倍,髓鞘修復率達 55%;經腦源性神經營養因子(BDNF)預處理后,細胞存活率提升 40%,神經突分支數增加 2.3 倍,可模擬神經嵴祖細胞在神經損傷后的修復作用,適用于探究周圍神經再生機制。
神經退行性疾病研究領域,該細胞經 6 - 羥基多巴胺(6-OHDA)處理后,多巴胺能神經元標志物 TH 陽性率下降 60%,活性氧水平提升 75%,凋亡率達 42%,能很好地模擬帕金森病模型中神經嵴來源神經元的損傷過程,為探究神經嵴相關神經元退變機制提供實驗基礎。此外,該細胞與神經膠質細胞共培養時,星形膠質細胞的神經營養因子分泌量增加 3 倍,可用于探究神經嵴祖細胞與膠質細胞的相互作用在神經保護中的機制。
培養與保存規范:推薦使用含 20% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養基,添加 20ng/mL 堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、10ng/mL 表皮生長因子(EGF)及 1% 抗生素混合液,培養環境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養箱。培養基需每天更換,以維持細胞的增殖活性和分化潛能。傳代時,用 PBS 沖洗細胞 2 次,加入專用細胞解離液,37℃孵育 5-7 分鐘,待細胞間隙增大后輕輕吹打使細胞脫落,傳代比例為 1:2-1:3,每 3 天傳代一次,避免細胞過度密集導致分化。
凍存液采用培養基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清的混合液,細胞濃度調整為 4×10?個 /ml,經程序降溫(-20℃1 小時→-80℃過夜→液氮保存)后,復蘇存活率達 85% 以上,2 代內可恢復正常的生長和分化能力。運輸采用干冰冷凍運輸或專用細胞運輸培養基,收到細胞后需靜置培養 12 小時,更換培養基后觀察細胞形態,確認神經突生長正常且無異常漂浮物后進行實驗。該細胞系僅限科研使用,操作時需避免頻繁更換誘導因子濃度,以防影響細胞分化方向穩定性。
N1 大鼠骨髓源神經嵴祖細胞系以其穩定的神經嵴細胞特性、多樣的分化潛能及顯著的神經修復能力,在神經發育生物學、再生醫學及神經疾病研究中發揮著重要作用,為揭示神經嵴細胞的生物學功能和開發神經損傷治療策略提供了可靠的細胞模型。
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