RNLEC/HL-039大鼠正常肺上皮細(xì)胞系
RNLEC/HL-039大鼠正常肺上皮細(xì)胞系作為源自大鼠肺組織的上皮細(xì)胞模型，因保留肺上皮細(xì)胞的氣體交換輔助功能、屏障保護(hù)作用及損傷應(yīng)答特性，在肺部生理功能調(diào)控、肺損傷機(jī)制及呼吸系統(tǒng)疾病研究中具有重要價(jià)值，成為探究肺上皮細(xì)胞生物學(xué)特性及相關(guān)疾病的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)工具。
細(xì)胞特性與來(lái)源背景：該細(xì)胞系源自大鼠肺實(shí)質(zhì)的支氣管及肺泡上皮組織，經(jīng)原代培養(yǎng)和純化獲得。細(xì)胞形態(tài)呈典型上皮樣，多為立方形或多邊形，胞體大小均勻（直徑約 18-22μm），胞質(zhì)豐富且呈嗜酸性，可見(jiàn)大量的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，約 15% 細(xì)胞可見(jiàn)細(xì)小的胞質(zhì)突起，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，位于細(xì)胞中央，核仁清晰。生長(zhǎng)方式為貼壁生長(zhǎng)，呈單層鋪路石樣排列，具有明顯的接觸抑制現(xiàn)象，傳代后 24 小時(shí)貼壁率達(dá) 94%。核心參數(shù)符合正常肺上皮細(xì)胞特征：倍增時(shí)間約 62 小時(shí)，連續(xù)傳代 20 次后仍保持穩(wěn)定的生物學(xué)特性；表面標(biāo)志物表達(dá)du特，細(xì)胞角蛋白 18（CK18）陽(yáng)性率達(dá) 95%，肺上皮特異性標(biāo)志物甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子 - 1（TTF-1）陽(yáng)性率 93%，緊密連接蛋白 occludin 陽(yáng)性率 91%；具有正常的二倍體核型（染色體數(shù) 42 條），無(wú)染色體畸變；屏障功能顯著，跨上皮電阻（TEER）值達(dá) 380Ω?cm2，對(duì)氧氣的通透性達(dá)適宜生理范圍；分泌功能活躍，表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白 A（SP-A）基礎(chǔ)分泌量達(dá) 30ng/mL，黏液蛋白（MUC5B）分泌量達(dá) 22ng/mL；無(wú)微生物污染，細(xì)胞純度達(dá) 97%，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
科研應(yīng)用價(jià)值：在肺部氣體交換輔助研究中，RNLEC/HL-039 細(xì)胞經(jīng)低氧（5% 氧氣）處理 48 小時(shí)后，缺氧誘導(dǎo)因子 - 1α（HIF-1α）表達(dá)量增加 4.2 倍，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）分泌量提升 55%，可模擬缺氧狀態(tài)下肺上皮細(xì)胞對(duì)血管生成的調(diào)控過(guò)程，為解析肺部氣體交換的輔助調(diào)節(jié)機(jī)制提供理想模型。
肺損傷修復(fù)研究方面，該細(xì)胞經(jīng)脂多糖（LPS）處理后，炎癥因子 IL-6 分泌量增加 4.8 倍，乳酸脫氫酶（LDH）釋放量提升 60%，細(xì)胞凋亡率達(dá) 38%；而經(jīng)肺表面活性物質(zhì)處理后，細(xì)胞存活率提升 50%，炎癥因子水平下降 55%，可模擬細(xì)菌性肺炎引起的肺上皮損傷及修復(fù)過(guò)程，適用于探究肺損傷修復(fù)的分子機(jī)制。
呼吸系統(tǒng)疾病研究領(lǐng)域，該細(xì)胞經(jīng)二氧化硅顆粒（50μg/mL）處理后，氧化應(yīng)激水平提升 65%，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 -β1（TGF-β1）表達(dá)量增加 4.5 倍，細(xì)胞外基質(zhì)蛋白分泌量提升 40%，能很好地模擬塵肺形成過(guò)程中的肺上皮細(xì)胞損傷，為探究塵肺等間質(zhì)性肺病的發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。此外，該細(xì)胞與肺巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，巨噬細(xì)胞的吞噬活性提升 45%，炎癥因子 TNF-α 分泌量增加 3.2 倍，可用于探究肺上皮細(xì)胞與免疫細(xì)胞相互作用在肺部炎癥中的調(diào)控機(jī)制。
培養(yǎng)與保存規(guī)范：推薦使用含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基，添加 2mM 谷an酰胺、0.1ng/mL 表皮生長(zhǎng)因子（EGF）及 1% 抗生素混合液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基需每 2-3 天更換一次，以維持細(xì)胞的正常功能。傳代時(shí)，用 PBS 沖洗細(xì)胞 2 次，加入專(zhuān)用上皮細(xì)胞解離液，37℃孵育 8-10 分鐘，待細(xì)胞間隙增大后輕輕吹打使細(xì)胞脫落，傳代比例為 1:2-1:3，每 5-6 天傳代一次，避免過(guò)度傳代導(dǎo)致功能下降。
凍存液采用培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清的混合液，細(xì)胞濃度調(diào)整為 3×10?個(gè) /ml，經(jīng)程序降溫（-20℃1 小時(shí)→-80℃過(guò)夜→液氮保存）后，復(fù)蘇存活率達(dá) 86% 以上，3-4 代內(nèi)可恢復(fù)正常的生長(zhǎng)和功能。運(yùn)輸采用干冰冷凍運(yùn)輸或培養(yǎng)瓶活細(xì)胞運(yùn)輸，收到細(xì)胞后需靜置培養(yǎng) 24 小時(shí)，更換培養(yǎng)基后觀察細(xì)胞形態(tài)，確認(rèn)無(wú)異常漂浮物且排列規(guī)則后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞系僅限科研使用，操作時(shí)需避免頻繁更換培養(yǎng)條件，以防影響其屏障功能和分泌活性。
RNLEC/HL-039 大鼠正常肺上皮細(xì)胞系以其穩(wěn)定的肺上皮特性、完整的生理功能及典型的損傷應(yīng)答能力，在肺部生物學(xué)研究與呼吸系統(tǒng)疾病機(jī)制探索中發(fā)揮著重要作用，為揭示肺部疾病的發(fā)病機(jī)制和開(kāi)發(fā)肺保護(hù)藥物提供了可靠的細(xì)胞模型。
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