來源與構建：該細胞系以 BHK-21 倉鼠胚腎細胞為親本，通過兩步轉染法構建：先導入含 T7 RNA 聚合酶基因的表達載體（含新mei素抗性基因），篩選獲得穩定表達株；再轉入 Tet0n 系統元件（含四環素應答啟動子 TRE 與嘌呤霉素抗性基因），經雙重抗性篩選獲得最終細胞系?！癟7 pol/p/N" 標識其含 T7 聚合酶（T7 pol）及雙抗性篩選標記（p 嘌呤霉素、N 新mei素），“Tet0n" 明確其誘導表達特性。

形態與增殖：體外培養呈典型成纖維樣形態，貼壁生長，細胞呈長梭形，排列疏松，邊界清晰，核質比適中。在 37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 24-30 小時，適應含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基，傳代 50 次以上仍保持穩定生長速率，T7 聚合酶表達及誘導系統活性無明顯衰減，凍存復蘇后存活率達 85% 以上。

表達特征：該細胞系的核心功能在于基因表達調控：基礎狀態下（無誘導劑），Tet0n 系統處于沉默狀態，外源基因表達量＜基礎值的 1%；加入四環素類似物（如多xi環素，1μg/mL）后，TRE 啟動子被激活，T7 聚合酶介導外源基因（含 T7 啟動子）高效轉錄，表達量可提升 100-1000 倍（通過熒光蛋白報告基因驗證），且誘導反應迅速（2-4 小時達峰值），撤去誘導劑后 24 小時內表達量降至基礎水平，調控動態范圍顯著優于普通誘導系統。

優勢：誘導效率高且調控范圍廣，可實現外源基因從 “沉默" 到 “高表達" 的精準切換；T7 聚合酶與 T7 啟動子的特異性結合，避免內源性 RNA 聚合酶干擾，表達特異性強；兼容多種外源基因載體，適用范圍覆蓋病毒基因組、全長 cDNA 及小片段基因；培養條件簡單，貼壁牢固，操作便捷，適合實驗室常規操作。

局限性：高濃度誘導劑（＞2μg/mL）可能對細胞產生輕微毒性（增殖速率下降 10%-15%），需優化誘導濃度；部分外源基因的高表達可能導致細胞應激反應（如未折疊蛋白反應），需結合壓力應答抑制劑使用；作為倉鼠細胞，翻譯后修飾（如糖基化）與人類細胞存在差異，重組蛋白功能研究需結合人源細胞驗證。

培養條件：常規使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基，添加 400μg/mL G418 與 2μg/mL 嘌呤霉素維持雙抗性篩選，37℃、5% CO?培養箱中生長良好。傳代時控制融合度在 70%-80%，采用溫和方法分離細胞，避免過度處理影響細胞活性。誘導實驗前需更換無四環素血清培養基，消除血清中誘導劑干擾。

質控與安全：定期通過 Western blot 檢測 T7 聚合酶表達，熒光報告基因實驗驗證誘導效率（確保誘導倍數＞100 倍）；STR 鑒定排除交叉污染，支原體檢測需為陰性。凍存使用含 10% DMSO 的wan全培養基，液氮保存可維持活性 5 年以上，復蘇后傳代 2 次待狀態穩定后用于實驗，涉及病毒操作時需符合相應生物安全等級要求。