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細胞培養一般方法有哪些
閱讀：804 發布時間：2022-11-9
細胞培養首先分為原代培養和傳代培養.
一、原代培養需要從組織中消化、分離、純化出單細胞,然后繼續進行傳代、凍存；
二、傳代培養首*行細胞復蘇:
1.應遵守慢凍快融的原則.先將水溫鍋調至37-38度,取出凍存的細胞迅速放入后交細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化.
2.在無菌臺內將培養基加入培養瓶內,然后用無菌吸管從凍存管內取出細胞,置培養瓶內輕輕搖晃,使細胞均勻后置培養箱內培養,24h后換液；也可復蘇當時離心（1000rpm 5min左右）后,培養基重懸培養,適時換液.
細胞傳代:
1.貼壁細胞:對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死細胞,50ml培養瓶加入消化液約0.6ml,按此比例進行消化,(根據配制強度經驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml培養基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后收集離心（1000rpm 5min左右）,新鮮培養基重懸沉淀,加入培養基后繼續培養或實驗.
2.懸浮細胞:一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內,加入培養基繼續培養,如要高濃度或需更換新培養基,可先離心（1000rpm,5min左右）后加入培養基,輕輕吹勻后,分置其它培養瓶內加入培養基繼續培養.