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HUVEC細胞培養攻略
臍靜脈內皮細胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC）是臍靜脈的重要構成細胞之一。當進行血管內皮細胞實驗時，通常使用人臍靜脈內皮細胞，而非靜脈內皮細胞或動脈內皮細胞。永生化的HUVEC會通過慢病毒轉染的方式攜帶RFP基因或GFP基因。
HUVEC細胞基本信息
| HUVEC細胞基本信息 | |
| 名稱 | HUVEC（人臍靜脈內皮細胞） |
| 形態 | 上皮樣 |
| 生長特性 | 貼壁 |
| 接種密度 | 8.0 x 103-3.0 x 104 viable cells/cm2 |
| 傳代比率 | 1:2-1:3 |
圖1 HUVEC（人臍靜脈內皮細胞）
首先要討論的是HUVEC的“嘴巴刁不刁"？通常來說，HUVEC的“胃口"還是蠻“刁"的，營養需求很高，除了營養種類豐富的F12和不可少的胎牛血清（如表2所示），肝素和血管內皮生長因子也是必須的。如圖2所示，長勢良好的HUVEC呈鵝卵石樣，輪廓清晰，鋪展均勻，一般2-3天可傳代。
下表為HUVEC精心準備的“食譜"
| 營養 | 含量 |
| F12(abs9563) | 0.9 |
| 胎牛血清（abs981） | 0.1 |
| 肝素（abs47014863） | 終濃度0.1mg/ml |
| ECGS血管內皮生長因子（ abs04176） | 0.03-0.05mg/ml |
| 雙抗（abs9244） | 0.01 |
圖2 長勢良好的HUVEC（人臍靜脈內皮細胞）
其次要討論一下為啥頭天換液，第二天HUVEC無限細胞系突然出現空泡化？如圖3所示，嚴重空空泡化的HUVEC。這里要注意的是有限細胞系的空泡化往往是細胞凋亡的顯著特征，與細胞本身狀態有關。而無限細胞系空泡化通常與外界因素有管，有以下兩種可能： 第一點是培養液的pH值與細胞正常所需pH值差別太大，導致細胞代謝異常，出現空泡化；第二點是在細胞培養過程中，由于血清濃度不夠、藥物作用、外界刺激等情況下導致細胞代謝出現問題，內質網應激狀況下會出現細胞空泡化的情況。
圖3 空泡化的HUVEC（人臍靜脈內皮細胞）
解決細胞空泡化，通常有兩種方法：1. 測定完培的pH，看其酸堿性是否適宜。多數細胞適宜的pH范圍為7.2-7.4。2. 若培基或血清是開封存放很久的，可換用新鮮的完配給細胞換液；若都是新開封的，可換用新批次的基培或血配制培養液，給細胞換液觀察。
最后要討論的是如何解決HUVEC聚團問題？培養瓶尤其是培養板的親水性較差時或血清中的促貼壁因子不足時，會導致HUVEC細胞聚團問題。解決辦法：培養瓶前一天用明膠（abs47051214)包被可有效預防HUVEC聚團。包被方法：以 T25 培養瓶為例，取5ml的明膠，加入培養瓶， 放置37℃條件下至少30分鐘，然后用槍頭將液體吸出即可。如圖示4所示，是鋪展均勻的HUVEC（人臍靜脈內皮細胞）。
圖4所示，正常貼壁，伸展均勻的HUVEC（人臍靜脈內皮細胞）
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| abs962 | PBS緩沖液 | 500ml |
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| abs9479 | 無DMSO無血清細胞凍存液 | 100mL |
| abs9417 | 無血清細胞凍存液 | 100mL |
| abs9473 | 細胞凍存液(含血清) | 100mL |
關鍵詞：HUVEC、臍靜脈內皮細胞、空泡化、衰老、聚團
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