一、樣品預處理（維持嫩芽活性與結構完整）

1. 取材與固定

• 選材標準：選取萌發 3-7 天的小麥幼苗（芽長 1-2 cm），優先選擇長勢一致、無機械損傷的嫩芽，避免老化或病弱樣本。

• 截取方法：用解剖刀在芽基下方 1-2 mm 處斜切（減少水分流失），保留完整的芽鞘、生長點及幼葉，立即置于載玻片上。

• 臨時固定：滴 1-2 滴蒸餾水或 0.5% 瓊脂糖溶液（40℃溫熱后冷卻），輕輕覆蓋蓋玻片（避免氣泡壓迫嫩芽），若需長時間觀察，可改用底部透氣的培養皿（如 Cellvis 玻璃底培養皿），保持濕度。

2. 對比度增強（針對透明組織）

• 簡易染色：用 0.05% 中性紅溶液染色 1-2 分鐘，水洗后觀察（液泡呈紅色，細胞壁無色），或用 1% 碘 - 碘化鉀溶液染色（淀粉粒呈藍色，適用于胚乳附近組織）。

• 物理修飾：若嫩芽表面光滑導致反光，可在載玻片底部墊一層薄紗布（散射光線，減少鏡面反射）。

二、顯微鏡參數設置與操作技巧

1. 光學系統調節

2. 特殊功能應用

• 立體觀察：利用 SZ61 的雙光路設計，輕微左右移動頭部，感知嫩芽的三維結構（如芽鞘包裹的幼葉卷曲程度）。

• 光闌調節：旋轉底座光闌至 “小光圈"（縮小通光孔徑），增加反差，凸顯嫩芽邊緣輪廓（尤其適用于透明幼葉）。

三、重點觀察區域與特征記錄

1. 生長點（分生組織）

• 低倍觀察：可見芽頂端半透明圓錐狀突起，直徑約 0.1-0.2 mm，周圍環繞葉原基（小葉片狀結構）。

• 高倍觀察：切換 4.5× 物鏡，觀察細胞排列（密集、無明顯液泡），若染色可見細胞核（DAPI 染色呈藍色），偶見分裂期細胞（染色體凝聚）。

2. 芽鞘與幼葉

• 芽鞘結構：管狀包裹幼葉，表皮細胞呈長條形，斜射光下可見表皮毛（透明單細胞絨毛，長度 50-100 μm）。

• 幼葉展開動態：記錄葉尖從芽鞘伸出的角度（每日同一時間測量），正常生長時每日展開 10°-15°，逆境下（如干旱）展開速率降低。

3. 維管束分化

• 用 1% 番紅染色 5 分鐘，水洗后觀察：木質部導管呈紅色，分布于芽鞘與幼葉中脈，低倍下呈紅色線條狀，高倍可見導管分子的環紋或螺紋加厚。

四、動態記錄與定量分析

1. 延時攝影設置

• 硬件連接：通過三目鏡筒接入 DP27 相機（或手機適配器），使用 CellSens 軟件設置拍攝參數：

• 間隔：生長旺盛期（1-3 天芽）15-30 分鐘 / 張，緩慢生長期（4-7 天芽）1-2 小時 / 張；

• 時長：連續拍攝 24-48 小時，保存為 TIFF 序列（避免 JPG 壓縮失真）。

• 環境控制：顯微鏡旁放置濕度計（濕度≥60%），溫度維持 22±2℃（可用加熱墊包裹載物臺）。

2. 定量分析方法

五、常見問題與解決方案

六、設備維護與安全提示

1. 清潔保養：

• 觀察后用無塵布蘸 75% 乙醇擦拭載物臺，避免瓊脂糖或染液殘留；

• 若物鏡沾染污漬，用鏡頭紙蘸無水乙醇輕輕擦拭（沿一個方向，避免來回摩擦）。

2. 安全操作：

• 染色劑（如碘液）需戴手套操作，避免接觸皮膚；

• 長時間觀察時，每 1 小時暫停 5 分鐘，防止光源過熱影響設備壽命。