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葡聚糖凝膠的分類方法介紹

閱讀:1711      發布時間:2019-11-13
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  葡聚糖凝膠指的是由一定平均相對分子質量的葡聚糖(dextran) 和甘油基以醚橋形式相互交聯而成,具有立體網狀結構,應用面廣的一類凝膠,國外商品名為Sephadex。交聯度的大小,可通過控制交聯劑(一般為環氧氯丙烷) 和葡聚糖的配比以及反應條件來控制。
 
  方法分類:
 
  1.乙醇浸泡:在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
 
  2.無鹽水浸泡:室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹,然后;
 
  3.鹽酸浸泡:在常溫下再用0.2NHCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗中性;
 
  4.將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據裝柱要求一次性置入柱內,注意保持濕態裝柱,并避免柱內產生氣泡或斷層;
 
  5.上樣前平衡層析柱少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);
 
  6.凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關,柱高控制在40-50cm以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1即可;
 
  7.洗脫方法:可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;
 
  8.在位清洗(CIP)凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以少三個柱體積平衡緩沖液再生。

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