數(shù)據(jù)讀取和處理
以夾心法為例
1
推薦使用酶標儀進行雙波長檢測，測定450 nm和630 nm波長下的OD值，并用450 nm的OD測定值減去630 nm的OD測定值。
2
ELISA的樣本和標準品通常要設置1~2個復孔進行檢測，分別求出標準品、樣本吸光度的平均OD值。
3
每個標準品和樣品的OD值應減去空白孔的OD值。
4
以標準品濃度為橫坐標，吸光度OD值為縱坐標，推薦使用Origin或ELISA Calc軟件繪制標準曲線，樣品中待檢物質的含量可通過對應OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
結果計算
若使用Origin軟件建立標準曲線，詳細步驟如下：
第一步: 打開軟件，分別在A(X)列和B(Y)列輸入標準品濃度和標準品OD值。
第二步：選擇擬合曲線類型
選中上步輸入的數(shù)值，按如下操作依次點擊選項。
第三步：在左側選擇<Find X/Y>，右側勾選< Find X from Y>。完成上述操作后，點擊Fit按鍵，擬合曲線和相關信息將自動生成。
第四步：查看標準曲線信息（如參數(shù)值，R-Square等）
第五步：根據(jù)標準曲線計算樣本濃度
選擇第四個工作表<Fit NLF Find X from Y1>，在左側A1（Y）輸入樣本的OD值，對應的濃度將在右列自動生成。
注意事項
1. 如果樣本進行了稀釋，計算樣本濃度時請乘以相應的稀釋倍數(shù)。
2. 若樣本OD值高于標準曲線上限，應做適當稀釋后重新檢測，計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù)。
若使用ELISA Calc軟件建立標準曲線，詳細步驟如下：
第一步：將標準曲線數(shù)據(jù)在Excel表格中整理成兩列，第一列是濃度，第二列是平均OD值。
第二步：打開ELISA Calc軟件，復制Excel中數(shù)值部分，點軟件的<粘貼>；選擇<回歸/擬合模型>，一般優(yōu)先選擇Logistic曲線擬合（四參數(shù)）、直線回歸或二次曲線回歸；點擊<回歸/擬合>。
第三步：點<由Y計算X值>，將樣本OD值在Excel中整理成一列，右鍵選復制，然后點軟件的<粘貼>，點軟件的<復制>，即可將計算的結果到Excel中粘貼。
注意事項
1. 如果樣本進行了稀釋，計算樣本濃度時請乘以相應的稀釋倍數(shù)。
2. 若樣本OD值高于標準曲線上限，應做適當稀釋后重新檢測，計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù)。
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