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水產品中孔雀石綠檢測的固相萃取方法

2017-4-26  閱讀(941)

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水產品中孔雀石綠檢測的固相萃取方法

 

SuperClean AL-A

一、實驗目的

本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法,HPLC 法作為分析方法,檢測水產品中孔雀石綠含量。該方法可簡化樣品的前處理過程,節省有機溶劑的使用,操作簡便。

二、實驗目標物

孔雀石綠(CAS:569-64-2)

三、應用范圍

本方法適用于水產品中孔雀石綠的檢測的 HPLC 檢測及確證。四、參考標準

GB/T 19857-2005 水產品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定》五、實驗材料

NuAnalytical SuperClean Alumina-A 固相萃取柱 1000 mg/3mL。六、實驗方法

1、 樣品待測溶液制備

準確稱取魚肉樣品 5.0 g 于 50 mL 離心管 中,加入 1.5 mL 20%的鹽酸羥胺,2.5 mL 1.0

mol/L 的對甲苯磺酸溶液,5.0 mL 乙酸鈉-對甲苯磺酸緩沖液(4.95 g 無水乙酸鈉及 0.95 g  

-甲苯磺酸于950ml水中,用乙酸調p至 4.5,用水定容至1 L),勻漿機均質3s  10000 r/min)。

加入 10 mL 乙腈,劇烈振搖 30 s。加入 5 g 酸性氧化鋁,震蕩 30 s。離心機離心 10 min3000

r/min,取上清液轉移至預先加好 10 mL 水、2 mL 二甘醇的離心管 中。加入 10 mL 乙腈至離心管 中,重復上述提取一次,合并乙腈層。

離心管 中加入 15 mL 二氯甲烷,振蕩 10 s,離心 10 min3000 r/min),取二氯甲烷層于梨形瓶中。繼續用 5 mL 乙腈、10 mL 二氯甲烷重復上述提取一次,合并兩次提取的二氯甲烷層。將提取液 45  ℃旋轉蒸發至 1 mL,再用 2.5 mL 乙腈溶解,待凈化。

2、活化

依次用 5  mL 乙腈活化

3、上樣和洗脫

將梨形瓶中的待凈化液轉移至柱中凈化,梨形瓶使用 2.5 mL×2 的乙腈洗滌瓶兩次,把洗滌液依次通過柱子,整個上樣過程保持流速不超過 0.6 mL/min,收集全部流出液。

4、重新溶解

流出液 45  ℃氮吹至近干,用 1 mL 乙腈定容,過 0.45 μm 濾膜。

5、HPLC 條件

色譜柱:SuperLu C18 (250×4.6 mm,    5μm)

檢測器:紫外檢測器,λ=618 nm

流動相:A-乙腈    B-0.05 mol/L 乙酸銨緩沖溶液流速:1.2 mL/min           進樣體積:50 μL

 

 

洗脫方式:梯度洗脫,梯度洗脫條件如下:

 

時間/min

A(%)

B(%)

0.0

60

40

3.00

60

40

3.10

80

20

10.00

80

20

10.10

60

40

13.00

60

40

 

 

七、實驗結果

1、0.1 mg/kg 魚肉中孔雀石綠的添加回收結果


表 1    0.1mg/kg 魚肉中孔雀石綠的添加回收結果

回收率(%

名稱

1

2

3

平均回收率(%

RSD%

孔雀石綠

93.4

94.4

92.8

93.5

0.86

 


2、添加水平為 0.1 mg/kg 魚肉中孔雀石綠檢測的液相色譜圖

圖 1    添加水平為 0.1 mg/kg 魚肉中孔雀石綠檢測的液相色譜圖

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