蛋白A或蛋白G微球(用含0.02％疊氮鈉裂解緩沖液配成10％(V／V)的混懸液，4℃保存)
不含DTT的Laemmli樣品緩沖液(2％SDS、10％甘油、60mmol／LTris，pH6.8和0.02％溴酚藍)
蛋白A或蛋白G微珠混懸液可在用前準備，4℃保存于含疊氮鈉的溶液中。
2) 冰上孵育1h。高親和力的結合反應在1h內完成。因而，1h的孵育時間可使大部分的抗體完成反應。
3) 在抗體-抗原反應液中加入100ul蛋白A或蛋白G微球(用裂解緩沖液配制成10％混懸液)，4℃搖動孵育1h。
盡管有些操作手冊建議反應過夜，但實際上并無好處，還會增加背景，因此不主張反應過夜，除某些特殊情況外。
4) 以10000g，4℃離心15s，收集微球。用裂解緩沖液清洗免疫復合物3次。裂解產物和洗滌緩沖液很容易通過抽吸法除去。
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