病毒性神經壞死病病毒RT-PCR試劑盒

Viral Nervous Necrosis Virus(VNNV)

產品及特點

病毒性神經壞死病病毒(Viral Nervous Necrosis Virus，VNNV)是一種RNA病毒，會引起病毒性神經壞死病病毒病，患病魚漂游于水面，并伴隨有游泳不協調、螺旋狀游泳等不同的神經癥狀，部分魚眼盲，體弱，不攝食，體褪色或發黑，但未見出血或糜爛。該疾病流行于除美洲和非洲外幾乎世界所有地區的海水魚類，對仔魚和幼魚危害很大，嚴重者在一周內死亡率可達100%，且近年受感染的魚類種類和受危害程度迅速增加，因此快速靈敏診斷具有重要意義。為此本公司開發了本產品，可用于在科研領域快速定量檢測病毒性神經壞死病病毒。它具有下列特點。它具有下列特點：

1. 一站式，用于不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。

2. 根據病毒性神經壞死病病毒的保守基因序列設計的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成，不需要中間 轉移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產品只能用于科研，不能用于臨床。

病毒性神經壞死病病毒RT-PCR試劑盒規格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分 分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。 

自備試劑 樣品 RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性 對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 流行性出血熱病毒 PCR 陽性對照的 100 倍稀釋作為制備的陽性對照；用水作為制備的陰性對照。 制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。

二、設置 RT-PCR 反應（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

4. 上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應參數為:

5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物， 則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物、 陽性對照有 122bp 預期的擴增產物的情況下，才有必要分析樣品的實驗結果， 如果有擴增產物則為陽性，如果無則為陰性。