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魚CD4分子（CD4）elisa試劑盒操作步驟
魚CD4分子(CD4)elisa試劑盒操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
48U/ml 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液
24U/ml 4 號標準品 150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
12U/ml 3 號標準品 150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
6.0U/ml 2 號標準品 150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
3.0U/ml 1 號標準品 150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品 10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） 。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。