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冰凍切片

閱讀:1585      發布時間:2015-7-15
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?  冰凍切片是指將組織在冷凍狀態下直接切片。
?  在切片前組織不經過任何化學藥品處理或加熱過程。
–  縮短了制片時間
–  抗原性不受損失
?  對穩定性差的抗原,如淋巴細胞表面抗原尤其適合。

?  組織凍結過程中,細胞內、外的水分會形成冰晶,凍結的速度愈慢,冰晶顆粒愈大,可嚴重影響組織、細胞的形態結構。因此制備凍塊時要求低溫、速凍。

1、冰凍組織塊的常用方法
?  液氮中冰凍:組織投入液氮中 (一196?C)中10~20sec;
?  干冰中加入丙酮(或異戊烷),液體立即氣化起泡,溫度降至一70?C ,將組織投入,若在干冰丙酮中置一盛有異戊烷的容器,組織投入該容器內結凍則更好;
–  上述組織在速凍時應浸埋于OCT包埋劑或甲基纖維素糊狀液內,以保護組織。
–  制成凍塊后若需保存,應以鋁箔或塑料薄膜封包,貯存于-70 ?C冰箱。

2、切片
?  供免疫組化用的冰凍切片同樣要求附貼平整,并有連續性。
?  載玻片也應清潔無油污,但一般無需涂抹粘附劑;
?  切片時,使用恒溫冷凍切片機,在箱內溫度-25 ?C 。切片厚度一般為4~8?m。

3、切片后處理
?  切好的冰凍切片,室溫下自然晾干1~2h后,入4?C丙酮固定10min,待干燥后作免疫組化染色或封存于-20℃。細胞
?  由于切片技術要求較高,不易得到連續性很好的切片,其形態結構亦不如石蠟片,且凍塊和切片不便于長期貯存,因此的應用受限。

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