三级片视频播放,精品三级片在线观看,A级性爱视频,欧美+日韩+国产+无码+小说,亲子伦XX XX熟女,秋霞最新午夜伦伦A片黑狐,韩国理伦片漂亮的保拇,一边吃奶一边做边爱完整版,欧美放荡性护士videos

您好, 歡迎來到化工儀器網

| 注冊| 產品展廳| 收藏該商鋪

13611928337

technology

首頁   >>   技術文章   >>   基因組DNA轉染

上海一研生物科技有限公司

立即詢價

您提交后,專屬客服將第一時間為您服務

基因組DNA轉染

閱讀:1352      發布時間:2016-2-22
分享:

    本實驗要加入PSV2-neo、DNA與外源DNA共轉染受體細胞,這樣可使受體細胞獲得新霉素(neo)基因的抗藥性,這樣即使癌基因沒有出現明顯的“轉化灶”,也可測出轉入的外源性基因的抗neo的標記。而且還可利用被neo基因導入的受體細胞通過G418選擇培養篩選轉化的細胞建立細胞株。若以獲取 “轉化灶”為目的,可不加入PSV2-neo DNA只需將從癌細胞中提取的基因組DNA導入受體細胞即可,其方法如下: 

1.基因組DNA轉染: 

(1)配制磷酸轉染液 

NaCl 8.0g 

Hepes 5.0g 用時現配,pH很重要一定要控制在6.95±0.65 

Na2HPO4 0.099g 消毒滅菌 -20℃貯存備用 

加溫水至 1000mL 

(2)按前面介紹的方法提取癌細胞基因組DNA。 

(3)取供體基因組DNA50~100μg,加3M NaCl或醋酸鈉,使zui終濃度至0.3M混勻。 

(4)再加2倍體積無水乙醇3000r/min離心10分鐘,去上清。 

(5)加入轉染緩沖液,待DNA充分溶解后,再加入2.5MCaCl2,含zui終濃度為125mM,用吸管輕輕吹打三次(不用攪拌器以防DNA袢結),置室溫下10~30分鐘,待液體透明度降低,出現微濁蘭色時,即可用于轉染細胞。 

(6)取生長狀態良好處于半匯合階段的對數生長期細胞,在轉染前4小時,更換培養液(5ml/瓶)1次。 

(7)轉染:向每瓶中加DNA-磷酸鈣沉淀物0.5~1mL/瓶,置37℃作用4~6小時。 

(8)培養:棄去培養液,用15%甘油處理3分鐘,無血清培養漂洗1次,接近匯合時血清用量降至5%,培養2~3周。 

(9)檢測:逐日觀察,待出現“轉化灶”后,克隆分離,擴大培養建立轉化細胞株。

會員登錄

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 临朐县| 隆林| 通城县| 右玉县| 承德市| 夏邑县| 博野县| 泸水县| 呼伦贝尔市| 措美县| 白水县| 云和县| 冷水江市| 疏勒县| 台北市| 新绛县| 库尔勒市| 阳谷县| 青海省| 高唐县| 全南县| 菏泽市| 惠州市| 临清市| 尼木县| 宁晋县| 巨野县| 灵台县| 新巴尔虎左旗| 科尔| 南丹县| 老河口市| 依兰县| 天祝| 吉木乃县| 徐州市| 息烽县| 蓝山县| 星子县| 绍兴市| 碌曲县|