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上海一研生物科技有限公司

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重組大腸桿菌目的蛋白的表達

閱讀:1064      發布時間:2017-7-24
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一、費氏弧菌發光桿菌實驗流程

二、實驗安排

第1次 菌體超聲破壁、離心、包涵體復性、 裝離子交換柱

第2次 測酶活、定蛋白離子交換層析 層析樣品進行濃縮、透析

第3次 濃縮、透析前、后樣品測活、定蛋白 裝分子篩柱

第4次 分子篩層析,并對收集樣品進行測活、定蛋白等

第5次 對分離純化各樣品進行蛋白電泳分析,并繪出分離純化表

三、實驗操作

第1次: 菌體超聲破壁、離心、包涵體復性、裝離子交換柱

實驗順序:超聲破壁→離心→裝離子交換柱→平衡→包涵體復性

掌握要點:破壁原理

裝離子交換柱方法

包涵體復性原理及方法

第2 次:測酶活、定蛋白、 離子交換層析分析 、 層析樣品進行濃縮、透析

實驗順序:測酶活→上柱→梯度洗脫→定蛋白→紫外吸收測蛋白峰→酶活曲線測定→收集樣品→ 濃縮 →透析

涉及單元實驗:測酶活、定蛋白、 離子交換層析、濃縮、透析

掌握要點:堿性磷酸單酯酶測活原理

紫外吸收法繪蛋白濃度曲線方法

離子交換層析原理及方法

濃縮及透析常用方法

第3次:濃縮、透析前、后樣品測活、定蛋白、裝分子篩柱

實驗順序:濃縮透析前、后樣品測活→考馬斯亮藍法定蛋白→裝分子篩柱→平衡

涉及單元實驗:測活、定蛋白、裝分子篩柱

掌握要點:考馬斯亮藍法測蛋白濃度方法

費氏弧菌發光桿菌裝分子篩柱方法

第4次:分子篩層析,并對收集樣品進行分析

實驗順序:測活樣品進行分子篩層析→紫外吸收測蛋白峰--酶活曲線測定→考馬斯亮藍法定蛋白

涉及單元實驗:破壁、離心、分子篩層析、復性

掌握要點:分子篩層析原理

對分離純化各樣品計算比活

第5次:對分離純化各樣品進行蛋白電泳分析, 并繪出分離純化表

實驗順序:蛋白電泳,同時進行數據分析

涉及單元實驗:蛋白電泳

掌握要點:掌握蛋白電泳方法

了解分離純化樣品純度鑒定的各種方法

繪制酶的分離純化表
費氏弧菌發光桿菌

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