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2017-11-23 閱讀(13956)
大家一直都覺得ceRNA的研究，就是研究LncRNA的簡便機(jī)制了是吧。因?yàn)槎疾挥脕碚撟C啥，就直接證明LncRNA和對應(yīng)的mRNA能同時結(jié)合miRNA就行了，不是么？
其實(shí)，也不全是，當(dāng)然，要是把ceRNA作為低分的LncRNA研究機(jī)制的話，那簡單的就是做一個Luciferase實(shí)驗(yàn)：
也就是利用Luciferase的3'UTR結(jié)合miRNA，來驗(yàn)證一下lncRNA和mRNA是不是分別能和miRNA結(jié)合。這個都是研究miRNA的基本套路。
但LncRNA并不會表達(dá)蛋白，所以用Luciferase的方法，并不靠譜。所以就需要通過別的實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證。
用于ceRNA研究的常用的方法還有MS2-RIP,就是體外過表達(dá)LncRNA的時候，在末端接上一個MS2蛋白結(jié)合的串聯(lián)序列，然后用MS2蛋白用RNA免疫共沉淀（RIP）的方法拉下來。當(dāng)然LncRNA上會帶有結(jié)合的miRNA，把拉下來的miRNA做real-time PCR就可以了。
當(dāng)然，類似的方法，還有用生物素標(biāo)記LncRNA的RIP，同樣也是將LncRNA拉下來，然后再通過Real-time PCR來看結(jié)合上去的miRNA的表達(dá)。
其實(shí)這兩種方法，都有異曲同工的作用，就是驗(yàn)證LncRNA與miRNA的結(jié)合。但是這兩種方法，其實(shí)也不能解釋mRNA是否能與LncRNA形成ceRNA的關(guān)系。于是就產(chǎn)生了這樣的方法：
由于miRNA形成RISC復(fù)合體結(jié)合的時候，是被AGO蛋白包裹的，主要是AGO2。也就是說，拉下AGO2蛋白，就能拉下結(jié)合在上面的miRNA，這樣RISC結(jié)合的LncRNA以及mRNA也會被拉下來。這就是AGO2-RIP，也就是通過拉miRNA，來分析miRNA結(jié)合的LncRNA以及mRNA的量：
用這種方法，可以相對直接地研究ceRNA之間的關(guān)系。當(dāng)然，在較高分的ceRNA的研究中，這種方法也是被經(jīng)常用到的。
