物質吸收由光源發出的某些波長的光可形成吸收光譜，由于物質的分子結構不同，對光的吸收能力不同，因此每種物質都有特定的吸收光譜，而且在一定條件下其吸收程度與該物質的濃度成正比，分光光度法是利用物質的這種吸收特征對不同物質進行定性或定量分析的方法。
使用前儀器要調零、調百校準，參比溶液又稱溶液。測量時用作比較的、不含被測物質但其基體盡可能與試樣溶液相似的溶液。通常，用參比溶液掃描的曲線應是一條平坦的直線。有時，基體中雖不含被測物質，但含有別的物質，這時必須保證其不影響測試。經常碰到的是試劑中含有被測物質，此時必須經過純化將其除去。否則將影響測定結果。在色譜分析中，有時基體中可能存在一個以上的和被測組分相距較遠的色譜峰，計算機在數據處理中不會計入它們，不影響測定。
以所含鐵離子是多少為例：
參比溶液與測量溶液則相差鐵離子含量，在測量之前要用不含鐵離子的參比溶液掃描，調整儀器后(調100的過程)，然后再測量含鐵離子溶液的比色皿，這樣測量溶液中的鐵離子會形成自己特定的峰值，次峰值與數據庫里基準峰值對比會得出溶液所含量了。如果數據庫中沒有鐵離子的曲線，你還要自己先用不同鐵離子濃度的溶液做工作曲線，然后進行測量。
1、機器開關在機器的右側，按一下會打開，有個小的屏幕，可以按數字鍵來操作選項，測吸光值操作。
2、按數字鍵1，進入選項，有當前參數、吸光度等。
3、點擊鍵盤上的GOTO鍵去設置，一般設置為600，輸入直接按數字鍵則可以。輸入之后按ENTER這個鍵，這個是確認鍵。
4、把樣品放到比色皿里面，留一個比色皿方蒸餾水，將蒸餾水的比色皿放到第yi個其余的依次放入。
5、蓋上一起的蓋子，拉環的位置正處于測定第yi個比色皿的位置，這一步需要歸零，按鍵盤上的ZREO鍵。
6、歸零之后，開始依次用力拖動把手，顯示屏上會顯示出對應的吸光度，依次紀錄數值，則能完成測定吸光值的實驗。
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