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電子顯微鏡檢測細胞方法
電子顯微鏡檢測細胞方法的信息介紹由濟南浩淼醫療設備有限公司為您提供。以下內容會證明電子顯微鏡是觀察細胞形態的方法
一、儀器與試劑
射電子顯微鏡或掃描電子顯微鏡，組織切片機，離心機，離心涂片機。
戊二醛固定液：取25%戊二醛原液10ml，加入0.2mol/L PBS液50ml，再加入蒸餾水40ml，混勻，4℃保存。
鋨酸固定液：將含有1g鋨酸的小瓶浸入清潔液一晚，用雙蒸水沖洗數遍后，將小瓶放在盛有50ml雙蒸水的100ml棕色磨口瓶內，擊破鋨酸小瓶使其內鋨酸溶于水，1～5ml小瓶分裝，避光，4℃保存。用時再稀釋1倍成1%的應用液。
二、操作步驟
離心收集約5×106 細胞，用PBS洗滌兩次后，棄上清，加1ml 2.5%戊二醛懸浮細胞，移入1.5ml Ep管中，室溫下4 000r/min離心15min，固定細胞0.5～1h；
在磷酸緩沖液里漂洗1～2h或更長時間，盡量將戊二醛冼凈，用1%的鋨酸固定液固定30min～1h；
固定完畢后加入50%乙醇脫水10min→70%乙醇10min→90%乙醇10min→90%丙酮10min→100%丙酮三次各10min；
丙酮與環氧樹脂1:1包埋2h，再放入純包埋劑（環氧樹脂包埋全浸透）數小時；
環氧樹脂包埋，62℃烤箱二天，進行超薄切片，用醋酸鉛鈾雙染法進行切片染色；
在透射電子顯微鏡下觀察細胞形態、細胞質及細胞核的變化，照相并記錄實驗結果；
三、結果判斷
電子顯微鏡是觀察細胞形態的方法，細胞核和細胞器的結構清晰易辨。凋亡細胞染色質固縮并凝結成塊，聚集在核膜周邊呈新月狀或環狀小體，細胞漿濃縮，內質網變疏松并與胞膜融合，形成一個個空泡，線粒體結構無明顯改變。細胞凋亡的晚期，細胞核裂解為碎塊，產生凋亡小體。壞死細胞的染色質稀疏呈細顆粒狀，分布無規律，邊界不清，細胞漿腫脹，細胞器結構破壞，細胞膜不完整。
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