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3) 上樣 將樣品加入到固相萃取柱并迫使樣品溶液通過固定相，使分析物和些樣本干擾物保留在固定相上。為了保留分析物，溶解樣品的溶劑必須較弱。如果太強，分析物將不被保留，結果回收率將會很低，這現象叫穿漏（breakthrough）。盡可能使用弱的樣品溶劑，可以使溶質得到強的保留或者說窄的譜帶。只要不出現穿漏，允許采用大體積的上樣量（0.5～1L）。 有時候固定樣品必須用個很強的溶劑進行萃取，這樣的萃取液是不能直接上樣的。所以萃取液要用個弱溶劑稀釋，

以得到個合適的溶劑總強度進行上樣。例如個土壤樣品采用50%甲醇萃取，得到2 mL萃取液，用8 mL水稀釋，得到10%的甲醇溶液，這樣就可以直接上反相固相萃取柱而不存在穿漏問題。