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雙光束分光光度計
雙波長分光光度計
在上面介紹的單波長分光光度法測量中，是用兩個吸收池，其裝參比溶液，在選定的波長下調其透光度為100%(即吸光度A=0)，然后再測量試樣溶液的吸光度。
當試液中含有兩種吸收光譜互相重疊的成分時，用這種單波長分光光度計單獨測量待測成分的吸光度就很困難，必須進行萃取分離或加掩蔽劑等才能完成測定。另方面，由于必須使用兩個吸收池，吸收池的差異常會影響測量的精度，使測定更微量的成分受到了限制。雙波長分光光度計則克服了上述缺點。
從光源發出的光分成兩束，分別經過各自的單色器2、3后，得到波長為λ1和λ2的兩束單色光。借切光器調制，這兩束光以定時間問隔交替照射裝有試樣溶液的吸收池。經檢測器的光電轉換和電子控制系統的工作，在數字電壓表上顯示出λ1和λ2的透光差值△T，或是顯示兩者的吸光度差值△A。
根據朗伯-比爾定律，試樣溶液在兩個波長λ1和λ2的吸光度的差值幽與溶液中待測物質的濃度成比例。雙波長分光光度法可將待測成分吸收光譜的任意波長設為零點，測定它與任意其他波長問的吸光度差值。
雙波長分光光度法具有下列優點：
(1)因為僅用個樣品池進行測量，不需要用參比吸收池，故可消除參比池與樣品池的不同而引起的誤差，使分析精度提高數倍;
(2)對混濁樣品進行測定時，可消除不同混濁度所引起的背景吸收，即基線的變化幾乎*被消除;
(3)適當選擇波長，可掩蔽共存組分的干擾，因此可簡化混合組分同時測定的手續及數據處理，并可提高靈敏度和準確度;
(4)由于背景吸收及其他干擾的消除，可測定微小光度，能檢測出0.01～0.005的消光度值;
(5)可應用于薄層色譜及紙上色譜的定量分析，測定時可消除薄層厚度不均勻所引起的誤差，使測量基線平穩。
但由于雙波長分光光度計光路結構和電學線路較為復雜，儀器價格比較昂貴，目前國內雙波長儀器并不普遍。應當指出采用單波長分光光度計進行雙波長分光光度法的定量分析也是可行的，只是選擇的參比波長λ1和測定波長λ2要適當。