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多肽合成常見問題及解答

時間:2015-9-15閱讀:2014
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1. 如何保存合成的多肽?

多肽在-20℃很穩定,特別是冷凍干燥并保存在干燥器中,在將它們暴露于空氣之前, 冷凍干燥多肽可以放于室溫。這將是濕度影響減少,當無法冷凍干燥時,的方法是以小的工作樣量存放。

對于含Cys, Met orTrP的多肽,脫氧緩沖劑對其溶解*,因為這種多肽可易空氣氧化, 在封瓶前,慢慢流過多肽的氮氣或氬氣也會降低氧化作用。含Gln或Asn的多肽也容易降解,所有這些肽與不含這些有問題解苷的那些肽相比,生命期有限。

2. 多肽的溶解性怎樣?都溶于哪些溶劑?

大多數肽的溶劑是超純抽氣水。稀乙酸或氨水分別對于堿性或酸性多肽的溶解很重要。這些方法不溶的多肽, 需要DMF(二甲基甲酰胺)、脲、guanidinium(胍鹽)、chloride(氯化物)或acetonitrile(乙腈)來溶解,這些溶劑可能某些實驗有副作用。所以我們建議設計多肽時要加注意。

殘基Ala, Cys , Ile, Leu, Met, Phe和Val將全增加多肽的溶解難度。

3. 多肽的保存如何操作?

包裝 1mg或更少的多肽按凈重包裝,聲明的小瓶重不含相關抗離子和水。 例如,氨基酸分析決定的肽含量是80%, 在1mg樣品中,那么瓶中毛重是1.25mg。

大量的多肽以毛重算。標出的重量含相關抗離子和水, 例如,25mg樣品中肽百分比為90%,那么,實際肽量為25mg×90%=22.5mg

不要把肽含量和純度搞混了。肽的純度可能是100%, 而肽含量相關帶電基團(如Arg, Lys )的抗離子量和肽親水性決定。這是合成肽的本身特性。

所有產品應存于冰箱, 為-20℃。多數肽以此方法可以存放幾年不變。

溶液肽遠比凍干形式不穩定,溶液應為中性pH(pH5-7), -20℃保存的,為避免樣品的反復凍融, 分成小樣存放。一份樣品融凍后未用完, 應扔掉,細菌降解有時會成為溶液肽的麻煩, 為克服此,肽應溶于無菌水, 或肽溶液用0.2μ M濾膜過濾。

4. 如何重建多肽重建過程如何操作?

多數肽溶于無菌蒸溜水。初次溶解時,要注意使初始濃度比要求濃度大,如果多肽僅有限溶解性, 這便允許加入其它溶解劑或緩沖鹽。

如果多肽在水中的溶解性有限,有幾種選擇可幫助溶解:

對堿性肽用稀乙酸(含Arg , Lys , His)

酸性肽用稀氨水(含Asp, lu)

對極疏水的肽用10%有機修飾物(acetonitrile , Methanol)

極不溶的肽用DM50或DMF

guanidine hydrochloride或脲的濃溶液也很有用, 與上述方法合用, 聲處理也是溶解多肽的有效手段。

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