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    AN11L818/AN11L819-2 x Taq PCR Master Mix
    • AN11L818/AN11L819-2 x Taq PCR Master Mix
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    貨物所在地:上海上海市

    地: 上海

    更新時間:2025-01-17 18:41:30

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    2 x Taq PCR Master Mix 是PCR 反應預混液,其中包含Taq DNA Polymerase、dNTPs、反應緩沖液、loading Dye 等成分,使用時只需取適量本產品,加入模板和引物

    產品描述

    2 x Taq PCR Master Mix 是PCR 反應預混液,其中包含Taq DNA Polymerase、dNTPs、反應緩沖液、loading Dye 等成分,使用時只需取適量本產品,加入模板和引物,并加入 ddH2O 補足體積,使反應體系濃度為 1× 即可進行 PCR 反應。本產品最長可擴增 5kb DNA片段,具有良好的擴增特異性和模板兼容性, PCR 產物 3' 端帶突出 A 堿基,純化后可直接用于 T/A 克隆。

    本產品中包含兩種染料,PCR反應完成后無需額外添加 loading buffer,可以直接進行電泳,且電泳過程中會出現兩個指示條帶。該染料不影響 PCR 擴增效率,但對于需要對 PCR 產物進行吸光度、熒光等光學分析的實驗,建議在分析前對 PCR 產物進行純化,或使用無染料的PCR預混液。

    訂購信息

    產品名稱

    貨號

    規格

    2 x Taq PCR Master Mix

    AN11L818

    2*1mL

    2 x Taq PCR Master Mix

    AN11L819

    5*1mL

    運輸與保存

    藍冰運輸。-20℃保存,有效期24個月。

    使用方法

    1.    常規 PCR 反應體系


    組分

    20 μL體系

    50 μL體系

    終濃度

    2 x Taq PCR Master Mix

    10 μL

    25 μL

    1 x

    正向引物(10 μM)(1)

    0.4-0.8 μL

    1-2 μL

    0.2-0.4 μM

    反向引物(10 μM)(1)

    0.4-0.8 μL

    1-4 μL

    0.2-0.4 μM

    DNA 模板(2)

    X μL

    X μL

    -

    ddH2O

    To 20 μL

    To 50 μL

    -



    (1) 引物推薦終濃度為 0.2~0.4 μM,效果不佳時可以在 0.1~1 μM 濃度范圍內進行調整; 

    (2)  不同模板最佳反應濃度有所不同,以 50 μL 體系為例:模板為基因組 DNA 時,一般推薦的使用量為 10~400 ng;當模板為質粒或病毒 DNA 時,一般推薦的使用量為 10 pg~20 ng。

    2.    常規 PCR 反應程序

    步驟

    溫度

    時間

    預變性(1)

    94℃

    3~5 min

    變性

    94℃

    15 sec

    退火

    53~65℃

    15 sec

    延伸(2)

    72℃

    30~60 sec/kb


    30~35 Cycles

    終延伸

    72℃

    5min

    (1)  該預變性條件適合絕大多數擴增反應, 對于一些復雜模板, 例如:菌液、菌落(尤 其是酵母)的PCR 擴增,預變性時間可適當延長至 10 min,以提高預變性效果;

    (2)  關于延伸速率,當目的片段長度不超過 2 kb 時,推薦使用 30 sec/ kb;當目的片段長度大于 2 kb 時,推薦使用 60 sec/kb。延伸速率與模板復雜程度有關,如遇產率較低可適當提高延伸時間。

    注:如果使用酵母菌液作為PCR 擴增模板,建議目的片段長度不超過2.5kb, 若超出2.5kb, 建議將酵母菌液預先進行破壁處理。

    3.    凝膠濃度對應的染料遷移距離

    瓊脂糖凝膠濃度

    金色條帶

    藍色條帶

    0.8%

    ~80 bp

    4000 bp

    1.0%

    ~40 bp

    2000 bp

    1.5%

    ~20 bp

    1500 bp

    2.0%

    <10 bp

    1200 bp

    2.5%

    <10 bp

    1200 bp

    3.0%

    <10 bp

    1200 bp

    注:染料會影響吸光度。

    注意事項

    1.     本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

    2.     本產品在短期 -20℃ 儲存時不會凝固,可以隨取隨用,如遇儲存溫度波動,體系結冰為正常現象不影響使用。

    3.     建議將所有的反應組分在冰上配制,最后加入2 x Taq PCR Master Mix

    4.     使用基因組模板進行較長片段擴增需要使用高質量純化的DNA模板,可以提高 PCR 成功率。

    5.     本產品擴增產物可用于 T/A 克隆。由于本產品含有 Loading Dye,PCR 產物需經過切膠回收后才可充分去除 Loading Dye。

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