色譜分離中，影響選擇性和分離的因素有很多，其中流動相中的有機溶劑類型以及不同的溶劑強度就是影響因素之一。對于反相色譜模式，常用的有機溶劑有甲醇、乙腈、四氫呋喃等，我們可以通過改變流動相中有機相種類或調整其比例，來改變選擇性和分離度，以呈現出不同的分離效果。
應用實例
4-（氯甲基）苯甲酸&3-（氯甲基）苯甲酸的分離
結構如圖所示：
兩種物質為間位與對位異構體，在乙腈體系下無法實現wan全分離。改變有機相種類后，可實現較好分離。
色譜條件1
色譜柱：Ultimate® XS-C18 4.6*250mm，5μm
流動相：0.1%磷酸水和乙腈，梯度洗脫
分析：兩目標峰有分離趨勢，但分離不wan全，將梯度調整成等度條件。
色譜條件2
色譜柱：Ultimate® XS-C18 4.6*250mm，5μm
流動相：0.1%磷酸水/乙腈=70/30
分析：分離有改善，但還是無法分離wan全，且依靠調整溶劑強度已無法改善其分離。
色譜條件3
在該色譜柱柱上進行方法優化，用甲醇替換乙腈，再次進行測試
色譜柱：Ultimate® XS-C18 4.6*250mm，5μm
流動相：0.1%磷酸水/甲醇=60/40
結果：兩目標物峰型良好，且可實現wan全分離。
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