哈嘍，相信有實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)的小伙伴，對于“離子對試劑"這個名詞并不陌生，因?yàn)樵谖覀內(nèi)粘z測中會經(jīng)常出現(xiàn)它們的身影，它們也實(shí)實(shí)在在幫助我們在日常檢測中，解決了很多棘手的問題。下面小編就簡單帶大家認(rèn)識下這位日常檢測幫助良多的“大功臣"。
01
原理
使用液相色譜法分析電離能力比較強(qiáng)的樣品時(shí)，樣品在反相色譜柱上的保留時(shí)間很短或者根本不保留，這時(shí)要加入相應(yīng)的離子對試劑，將分析物上的離子進(jìn)行結(jié)合，形成在柱子上有保留的分子。
02
離子對試劑種類
離子對試劑的種類和濃度對分離效果都有較大的影響。離子對試劑種類的選擇依賴于被分離樣品的性質(zhì)。
● 被分離溶質(zhì)是強(qiáng)酸或強(qiáng)堿，離子對試劑可以是強(qiáng)酸或強(qiáng)堿，弱堿或弱酸。
● 被分離的溶質(zhì)是弱酸或弱堿，則選用的離子對試劑必須是強(qiáng)堿或強(qiáng)酸。
● 對于溶質(zhì)結(jié)構(gòu)性質(zhì)相差較大的混合樣品，離子對試劑種類的選擇并沒有特殊要求。
● 離子對試劑疏水性的差別可以通過調(diào)節(jié)離子對試劑濃度和有機(jī)溶劑濃度獲得滿意的分離效果。
1. 用于酸性化合物：四丁基氫氧化銨（10%水溶液） 、四丁基溴化銨、十二烷基三甲基氯化銨。
2. 用于堿性化合物：戊烷磺酸鈉、己烷磺酸鈉 、庚烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉、癸烷磺酸鈉。
3. 其他離子對試劑：高氯酸鈉、三氟yi酸、七氟丁酸等。
常用離子對試劑 CAS號：
1-戊烷磺酸鈉 CAS:22767-49-3
1-己烷磺酸鈉 CAS:2832-45-3
1-庚烷磺酸鈉 CAS:22767-50-6
1-辛烷磺酸鈉 CAS:5324-84-5
1-癸烷磺酸鈉 CAS:13419-61-9
03
離子對試劑選用步驟
1．選擇一根適合的色譜柱，常為C18柱。
2．準(zhǔn)備流動相時(shí)僅使用HPLC級別的水和色譜級試劑。
3．選擇能給出最佳分離度的流動相成分和濃度。
4．如果樣品中有非離子化物質(zhì)，在嘗試離子化分離之前首先優(yōu)化分離情況。
5．選擇合適的離子對系列試劑以提供相應(yīng)的離子配對：對于酸性分析物使用酸性離子對試劑；對于堿性分析物使用堿性離子對試劑。
6．通過比較選擇所得分離度zui 好的離子對試劑。
7．一旦離子對試劑已經(jīng)確定，調(diào)節(jié)流動相的pH值將分離度zui大化；因?yàn)槲⑿〉膒H值改變對保留性質(zhì)和選擇性都有較大的影響，所以仔細(xì)的小幅度調(diào)節(jié)pH值。
8．理想狀況下，流動相中的離子對試劑濃度應(yīng)為0.005M，但是稍微增加離子對試劑可能會稍微增加保留性質(zhì)并因此優(yōu)化分離情況。
優(yōu)點(diǎn)
1．緩沖液制備簡單。
2．使用反相色譜柱，碳鏈長度選擇眾多，可用于增加保留時(shí)間、改善分離性質(zhì)。
3．即使使用較大離子，也能得到清晰的峰形且保持結(jié)果高度重現(xiàn)性。
4．分離時(shí)間縮短（與離子交換相比）。
5．適用于復(fù)雜混合物的分離（不同于離子抑制法）。
6．能夠同時(shí)分離離子化和非離子化的分析物。
7．有效改善峰形。
缺點(diǎn)
1．對色譜柱傷害較大。離子對試劑會對色譜柱造成不可逆的傷害，離子對試劑和固定相結(jié)合產(chǎn)生不可逆吸附，進(jìn)而影響固定相活性位點(diǎn)。比如十八烷基硅膠鍵合色譜柱，這種反應(yīng)對色譜柱影響很大，而且離子對試劑很難從色譜柱上沖洗干凈，會大大縮短色譜柱的使用壽命。
2．實(shí)驗(yàn)條件不穩(wěn)定。離子對試劑的濃度與其樣品的保留時(shí)間有直接的影響，而且離子對試劑對pH值比較敏感，配制流動相時(shí)要求精確度較高。否則直接影響實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和重現(xiàn)性。
3．用離子對試劑的實(shí)驗(yàn)色譜柱平衡時(shí)間較長，一般都建議小流速過夜平衡。
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