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說說蛋白質聚集體可以做哪些檢測呢
閱讀：2326發布時間：2021-6-28
蛋白質聚集體是蛋白類藥物研發和商業化過程中一個重要的挑戰之一。聚集體在蛋白質產品開發和生產過程的所有階段都可以觀察到，如蛋白表達、純化、凍干等。可能對產品的質量和功效有顯著的負面影響，其通常會減弱蛋白生物活性。此外蛋白聚集體可能存在潛在增強免疫原性的風險。
蛋白質聚集體的積累是許多神經退休性疾病的共同病理特征，并且與老化也密切相關。然而我們還不了解聚集體是怎樣形成和如何清除的；以及在它們的清除中，分子伴侶、蛋白酶和其它調控因子的復雜網絡是怎樣形成的。
很多研究運用有力的干擾，比如熱休克或蛋白酶抑制產生聚集體。然而這些壓力是非常強的而且是非特異性的，會引起全局細胞應激反應和無關蛋白聚集。另外有人運用對polyQ融合突變的亨廷頓蛋白的遺傳干擾進行聚集體研究。盡管有較高的特異性，但這些系統顯示對于聚集開始的時間和聚集形成的程度控制性很差。
蛋白質聚集體的檢測
1.可溶聚集體
最小的可溶聚集體是二聚體，可溶聚集體的大小上限則因蛋白質和溶液條件而異。這些可溶的蛋白聚集體，無論是通過物理相互作用還是化學修飾，通常可以用SEC-HPLC檢測。該方法的局限在于樣品在層析柱中的稀釋可能會導致聚集體的解離、不同蛋白質需要不同的流動相、同時流動相或高壓也可能會誘導蛋白質形成聚集體。
除此之外，其他的一些可以檢測蛋白質聚集體的方法有原位動態光散射、原位靜態光散射、分析超離心法、原子力顯微鏡、石英晶體微天平、電噴霧-差分電遷移率分析等。
2.不可溶聚集體
一般來說，不可溶聚集體包括亞可見微粒(<100μm)和各種形式的可見聚集體或顆粒。可見顆粒體/聚體的形貌取決于聚集機制和或實驗條件(如溶液pH)。
傳統的檢測亞可見微粒的方法是光屏蔽法，但其在檢測半透明顆粒和特征尺寸小于2μm的顆粒方面能力有限。流動成像分析因為其高的靈敏度、形態信息及可區分某些類型的顆粒而被廣泛應用于聚集體的檢測。
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