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蒂科(上海)生物科技有限公司

細胞復蘇的小技巧

時間:2022-8-9閱讀:1134

細胞培養是指細胞在體外的培養技術,即在無菌條件下,從機體中取出組織或細胞,模擬機體內正常生理狀態下生存的基本條件,讓它在培養皿中繼續生存、生長和繁殖的方法。通過細胞培養我們可以獲得大量的、性狀相同的細胞,以便于研究細胞的形態結構、化學組成及功能和機制。


細胞復蘇流程:


1、將凍存的細胞從液氮罐中取出,立即放入37°C的水浴中進行融化,輕柔晃動,加速融化,直到小瓶中只剩下一小塊冰,時長應控制在1min中;


2、用70%乙醇擦拭瓶外后轉移無菌操作臺中,打開瓶蓋前,用酒精燈火焰對瓶口進行消毒;


3、將預加熱的新鮮*培養基滴入小瓶中。緩慢用移液槍吸取瓶中液體至15ml離心管中,加入適量濃度和體積的*培養基,輕柔混合均勻;


4、200 × g左右細胞懸浮液離心5-10分鐘。實際的離心速度和持續時間因細胞類型而異。棄掉上清,加入新鮮*培養基重懸細胞,并將其轉移到適當的培養容器和推薦的培養環境中。


注意事項:


1、液氮溫度低,小心低溫對人造成的傷害,在液相中儲存的冷凍瓶在解凍時存在爆炸的風險,因此,取出凍存管的時候,要做好個人防護。


2、通常細胞集中儲藏在液氮中,取出時應迅速,避免溫差對其他凍存細胞造成影響。


3、復蘇細胞的核心技術,簡而言之就是快融,將在37°C水浴中快速解凍冷凍細胞(< 1分鐘。


4、解凍時,凍存管先放入無菌一次性PE手套中,再放入水中融化,避免污染也方便操作。


5、用預熱過的培養基慢慢稀釋解凍的細胞。


6、解凍細胞后,在培養皿中培養時,應盡量維持高密度,以提高細胞存活率。


7、注意無菌操作,避免細胞發生污染。


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