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骨髓瘤細(xì)胞懸液的制備方法分析

時(shí)間:2017/3/16閱讀:945
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zui常用的干細(xì)胞系為SP2/0和NS-1,均來(lái)自BALB/c小鼠骨髓瘤。一般在準(zhǔn)備融合前的兩周就應(yīng)開(kāi)始復(fù)蘇骨髓瘤細(xì)胞,為確保該細(xì)胞對(duì)HAT的敏感性,每3~6個(gè)月應(yīng)用8-氮雜鳥(niǎo)嘌呤篩選一次,以防止細(xì)胞的突變。骨髓瘤細(xì)胞懸液的制備方法如下:
1.將剛復(fù)蘇的瘤細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中,5% C02,37℃溫箱孵育。每2~3天換液一次,3~5天傳代一次,待細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定后方可供細(xì)胞融合用。于融合前48~36小時(shí),將骨髓細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)(一般按一塊96孔板的融合試驗(yàn)需2~3瓶100m1培養(yǎng)瓶培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行準(zhǔn)備)。
2.融合當(dāng)天,用彎頭滴管將細(xì)胞從瓶壁上輕輕吹下,收集于50m1離心管或融合管內(nèi)。
3. 1000r/min離心5~10分鐘,棄去上清液。
4.加入30m1不*培養(yǎng)基,同法離心洗滌一次。然后將細(xì)胞重懸浮于lOml不*培養(yǎng)基,混勻。
5.取骨髓瘤細(xì)胞懸液在倒置顯微鏡下觀察,生長(zhǎng)良好的細(xì)胞明亮呈圓形,排列整齊,形態(tài)完整,密度適宜(0.1x106~1x106/ml)。經(jīng)錐蟲(chóng)藍(lán)染色,活干細(xì)胞數(shù)應(yīng)大于90%。

人星形膠質(zhì)細(xì)胞微小RNA    英文名稱(chēng):    HA miRNA    規(guī)格:    1 µg
人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞微小RNA    英文名稱(chēng):    HA-c miRNA    規(guī)格:    1 µg
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人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞微小RNA    英文名稱(chēng):    HA-h miRNA    規(guī)格:    1 µg
人小膠質(zhì)細(xì)胞微小RNA    英文名稱(chēng):    HM miRNA    規(guī)格:    1 µg
人微血管內(nèi)皮細(xì)胞微小RNA    英文名稱(chēng):    HDMEC miRNA    規(guī)格:    1 µg
人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞微小RNA    英文名稱(chēng):    HDLEC miRNA    規(guī)格:    1 µg
人表皮角質(zhì)細(xì)胞微小RNA    英文名稱(chēng):    HEK miRNA    規(guī)格:    1 µg
人表皮角質(zhì)細(xì)胞-成人微小RNA    英文名稱(chēng):    HEK-a miRNA    規(guī)格:    1 µg
人表皮黑色素細(xì)胞-淺色素微小RNA    英文名稱(chēng):    HEM-l miRNA    規(guī)格:    1 µg
人表皮黑色素細(xì)胞-中色素微小RNA    英文名稱(chēng):    HEM-m miRNA    規(guī)格:    1 µg
人表皮黑色素細(xì)胞-深色素微小RNA    英文名稱(chēng):    HEM-d miRNA    規(guī)格:    1 µg
人成纖維細(xì)胞-胎兒微小RNA    英文名稱(chēng):    HEF-f miRNA    規(guī)格:    1 µg
人成纖維細(xì)胞-新生兒微小RNA    英文名稱(chēng):    HEF-n miRNA    規(guī)格:    1 µg
人成纖維細(xì)胞-成人微小RNA    英文名稱(chēng):    HEF-a miRNA    規(guī)格:    1 µg
人毛乳頭細(xì)胞微小RNA    英文名稱(chēng):    HHDPC miRNA    規(guī)格:    1 µg
人生發(fā)基質(zhì)細(xì)胞微小RNA    英文名稱(chēng):    HHGMC miRNA    規(guī)格:    1 µg
人毛囊外根殼細(xì)胞微小RNA    英文名稱(chēng):    HHORSC miRNA    干細(xì)胞規(guī)格:    1 µg

 

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