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腸膜明串珠菌培養基的配制

時間:2021/6/10閱讀:881
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腸膜明串珠菌培養基的配制:

1)、Camp-BAP固體培養基的配制:
稱取8.92g培養基,溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌,待冷卻至55°C左右加入200ul添加劑A、200ul添加劑B和10ml脫纖維裂解羊血,充分搖勻后倒平板。(添加劑A和B為購買附帶)。
2)、Skirrow固體培養基的配制:
稱取8.5g培養基,溶于200ml蒸餾水中高壓滅菌,待冷卻至55°C左右加入2ml FBP原液和10ml脫纖維裂解羊血,充分搖勻后倒平板。
FBP原液配置:
分別稱取0.5g焦亞硫酸鈉、0.5g丙酮酸鈉和0.5g硫酸亞鐵,溶于20ml蒸餾水中,濾膜過濾除菌,放置4°C冰箱可保存一周。
3)、布氏肉湯增菌液的配制:
稱取28.1g布氏肉湯粉末,溶解于1000ml蒸餾水中高壓滅菌,冷卻后備用。

2、增菌培養
寬鱗大孔菌將新鮮食品,如雞肉,減碎,取5g置于50ml離心管中,加入布氏肉湯至液面覆蓋雞肉樣品,擰緊離心管,先在37°C下預增菌4小時,在加入100 ul頭孢哌酮(30mg/ml),并顛倒混勻,放置在微需氧培養箱中42°C培養48小時。

3、分離純化

用接種環沾取增菌液劃線于Skirrow血平板上,在平板上挑取不溶血、灰色、有光澤、且邊緣整齊發亮的菌落在Camp-BAP平板上純化,挑取扁平、灰色、像水滴樣菌落多次純化后保存。

4、菌株培養

將純化的彎曲桿菌單菌落接種到Skirrow血平板上,放置在42°C的微需氧環境下培養48小時,觀察細菌生長狀態。微需氧條件的創造可用微需氧產氣袋和密閉培養罐,也可以用微需氧培養箱(三氣培養箱)培養。

5、菌株保存方法

挑取單克隆菌株在Skirrow固體培養基上平板劃線,放置在42°C的微需氧環境下培養48小時,用滅菌棉簽從平板上刮下長出的菌落,懸浮在50%甘油的布氏肉湯保種液中,置于-80°C超低溫保存。在-20°C冰箱中保存效果較差,存放一周后細菌復蘇率即顯著下降。此外,保存菌株需要每隔一年重新活化保存一次。

連翹酯苷B Forsythiaside B
金石蠶苷 Jinshi silkworm glycoside
升麻酮醇-3-O-α-L-拉伯糖苷 Cimicifuga Ketol -3-O- alpha -L- Arabic glycoside
木蝴蝶苷B Oroxin B
木蝴蝶苷A Oroxin A
西貝母堿 Sipeimine
黃獨素B Dioscorea bulbifera B
千層紙素A-7-0-β-D-葡萄糖醛酸苷 Oroxylin A-7-0- beta -D- glucuronide
漢黃芩苷 Wogonoside
五味子丙素 Wuweizisu C
歐當歸內酯A European Angelica lactone A
千金子二萜醇二乙酰苯甲酰酯 Thousands of gold two terpene alcohol two acetyl benzoyl ester
連翹酯苷A Forsythiaside A
桑根酮D Sanggenon D
α-香附酮 Alpha - cyperone
姜酮 Jiang Tong
具棲冬青苷 Pedunculoside
斯皮諾素 Spinosin

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