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4236次1．雜交瘤陽性克隆的篩選并非所有的雜交瘤細胞都能分泌針對目的抗原的特異性McAb，因此，必須通過可靠、簡便、快速的方法進行篩選和克隆化。具體方法依抗原性質及抗體類型而定。常用的方法有酶聯免疫吸附試驗、間接血凝試驗、放射免疫測定、直接和間接熒光抗體技術以及免疫酶斑點試驗等。
2．克隆化技術為確保McAb的純一性及無關克隆的過度生長，要將陽性的雜交瘤細胞進行單細胞分離培養，產生單克隆雜交瘤細胞。經反復2～3次檢測均為陽性的雜交瘤細胞，應及早進行克隆化培養。常用方法有：有限稀釋法（limiting dilution, LD )、軟瓊脂法、直接挑取法及熒光激活細胞分離儀（FACS)分離法。以LD法zui為常用，效果好，簡便。
(1）有限稀釋法：將細胞重懸，收集計數。按105,104,103,102到101的密度用RPMl 1640作系列稀釋（zui后一次用*培養液）。取一塊96孔板，預先按每孔105～106/100ul*培養液加好飼養細胞，然后加入8～10/ml的低密度細胞懸液，每孔100ul，置5% C02，37℃溫箱培養7～10天，其間盡量少作觀察。之后，選擇單個克隆生長的陽性孔再一次進行克隆。一般需要如此反復3～5次，直至達100％陽性孔時即可。
(2）軟瓊脂法：是將細胞置于瓊脂糖凝膠半固體培養液中增殖的方法。將雜交瘤細胞培養在軟瓊脂板上，待單個細胞形成群落后，再用吸管吸出，反復吹打以分散細胞。將吸出的細胞移入小孔中繼續培養。用這種方法可以吸出大量克隆進行增殖和分析。
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