倉(cāng)鼠腎細(xì)胞；HL-1說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 倉(cāng)鼠腎細(xì)胞；HL-1說明書
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C10
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

 龍血素B    分子式：    316.35    分子量：    C18H20O5    英文名稱：    Loureirin B    CAS號(hào)：    119425-90-0    
 高烏甲素    分子式：    584.71    分子量：    C32H44N2O8    英文名稱：    Gao Wu    CAS號(hào)：    32854-75-4    
 二氫石蒜堿    分子式：    289.32636    分子量：    C16H19NO4    英文名稱：    Two Shi Suanjian    CAS號(hào)：    6271-21-2    
 扁蓄苷    分子式：    434.35032    分子量：    C20H18O11    英文名稱：    Avicularin    CAS號(hào)：    22255-13-6    
 活性艷藍(lán)KN-R    分子式：    626.54    分子量：     C22H16N2Na2O11S3    英文名稱：    Reactive brilliant blue KN-R    CAS號(hào)：    2580-78-1    
 吖啶紅    分子式：    274.75    分子量：     C15H15ClN2O    英文名稱：    Ya Dinghong    CAS號(hào)：    2465-29-4    
 酸性ATT    分子式：        分子量：        英文名稱：    Acid black ATT    CAS號(hào)：        
 Dichloro[8-(di-tert-butylphosphinooxy)quinoline]palladium(II)      分子式：        分子量：        英文名稱：    Dichloro[8- (di-tert-butylphosphinooxy) quinoline]palladium (II)    CAS號(hào)：    1100332-45-3    
 鹽酸溴己新    分子式：    412.59    分子量：     C14H21Br2ClN2    英文名稱：    Hydrochloric acid bromide    CAS號(hào)：    611-75-6    
 鈀碳觸媒    分子式：        分子量：        英文名稱：    Palladium carbon catalyst    CAS號(hào)：        
 二苯胺磺酸鈉    分子式：    271.27    分子量：     C12H10NNaO3S    英文名稱：    Two aniline sulfonic acid sodium    CAS號(hào)：    6152-67-6    
 天青I    分子式：    305.83    分子量：     C15H16ClN3S    英文名稱：    Azure I    CAS號(hào)：    531-55-5  
1000U    Mlu    
200U    AMV 逆轉(zhuǎn)錄酶    
2500U    RNase 抑制劑 ( 人源 )    
5次    天凈沙非同位素探針雜交試劑盒    
GpC 甲基轉(zhuǎn)移酶 (M.CviPI)    130653-200    200U
cDNA *鏈合成試劑盒    60906-50    50 次
1000 μL    VDAC1 小鼠單抗    
100mL    非凍型拭子 DNA 保存液 B( 有拭子 )     
25g    葡聚糖凝膠 G-15    
10mg    Hoechst33342 干粉    
L- 天門冬氨酸    CAS56-84-8    25g
lambda(λ)DNA    90407A-5    5μg
10 次    小 RNA 克隆試劑盒    
1套    硅膠膜 DNA 離心吸附柱 ( 大提 )    
250g    聚乙二醇 6000    
25μL    Cy3-dCTP 溶液，10mM    
3-(3,4- 二羥基苯 )-L- 丙氨酸    CAS59-92-7    5g
SURE 種    12-255    1mL
50 次    一步法無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNAout    
1g    姬姆色素染料    
5g    固藍(lán) BB 鹽    
100mg    辣根過氧化物酶，偶聯(lián)    
吲哚 -3- 丁酸    CAS133-32-4    1g
RIPA 裂解液 ( 強(qiáng) )    131006-100    100mL