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即用型 PCR 試劑盒 3.01 mL*使用方法:
1. 以 30 uL 的標準 PCR 反應體系為例,如果反應體系不是 30 uL,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,加入下列成分:易錯 PCR Mix, 10× 3 uL 易錯 PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補水到 30 uL
2. 按已經優化的 PCR 條件進行一定循環數的 PCR(循環數與突變率的關系見下表),然后取 5 uL 電泳檢查。如果沒有優化的 PCR 條件,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯 PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環 30 次(見注) 72℃ 1 分鐘注:易錯 PCR 一般不需要熱啟動,也不需要在 PCR 結束后做延伸處理。
3. 電泳檢測是否得到預計長度的 PCR 產物。
即用型 PCR 試劑盒 3.01 mL*產品及特點:
易錯 PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機率引入隨機引入突變。如果有適當的選擇方法,則可從構建的突變庫選出所需突變體。易錯 PCR 和常規 PCR 的比較如下:本產品就是專門為廣大的研究工作者進行易錯 PCR 而開發,本產品具有下列特點:
1. 即開即用,十分簡單方便,尤其在生物制藥和酶學研究領域顯示出了它的*性。
2. 配方經過精心優化,突變率穩定,突變沒有趨向性。易錯 PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),詳見使用手冊疑難解答。
3. 比體內基因突變更快捷簡單,但如果在 PCR 引物中設計位點,則可使產物克隆到表達載體,也可以用于體內蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續易錯 PCR(sequential error-prone PCR),只需把上一次易錯 PCR 的產物用作下一次易錯 PCR 的模板即可,使每一次獲得的小突變累積而產生重要的有益突變。
5. 只適用于擴增 1kb 以下的產物,對于 1kb 以上的產物,建議分段擴增。
產品介紹:
規格及成分:
Bacillus schlegelii heterotrophic medium
Caloramator viterbensis medium
Clostridium stercorarium (a-g?) medium
Desulfobacterium catecholicum medium
Desulfuromonas chloroethenica medium
Francisella halioticida medium
Halobacterium medium
Hyphomicrobium medium
Marine ammonium mineral salts
Methanocalculus halotolerans medium
Methylothermus medium青春雙歧桿菌 Bifidobacterium adolescentis
黑曲霉 Aspergillus niger
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
PA317(小鼠成纖維細胞)5×106cells/瓶×2
桿菌屬 Lactobacillus sp.
菜豆根瘤菌 Rhizobium phaseoli
THP-1(人髓系白血病單核細胞)5×106cells/瓶×2
酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis
猴菌
球形芽胞桿菌 Bacillus sphaericus
F9(小鼠畸胎瘤細胞)5×106cells/瓶×2
酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis
苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti
RSC, 大鼠雪旺細胞
宇佐美曲霉 Aspergillus usamii
松塔牛肝菌 Strobilomyces strobilaceus
小鼠白血病細胞英文名稱:M1
Saos-2,人成骨肉瘤細胞
解脂亞羅酵母 Yarrowia lipolytica
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
Modified thermus 162 medium
Orotic acid medium
PY+X medium
Roseococcus suduntuyensis medium
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