原代細(xì)胞取材的基本要求和注意事項(xiàng)

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，是進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的*步，若取材不當(dāng)，將會(huì)直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)，現(xiàn)將取材的基本要求和注意事項(xiàng)敘述如下：

一、取材的基本要求

　?。?）取材要注意新鮮和保鮮 新鮮組織易于培養(yǎng)成功，取材時(shí)應(yīng)盡量在4~6h內(nèi)能制作成細(xì)胞，盡快入箱培養(yǎng)，若不能即時(shí)培養(yǎng)，應(yīng)將組織浸泡于培養(yǎng)液內(nèi)，于4℃存放。若組織塊較大，應(yīng)在清除表面血、壞死組織、脂肪和結(jié)締組織后，切碎于培養(yǎng)液內(nèi)4℃存放，但時(shí)間不能超過24h。對(duì)于已切碎的組織或血液、淋巴組織應(yīng)加入含10%二甲基亞砜的培養(yǎng)基，按細(xì)胞凍存方式于液氮中冷凍保存。

　　（2）取材應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌 所取標(biāo)本材料應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，為了確保無(wú)菌，對(duì)所取材料若疑有污染的可能，應(yīng)將所取組織在含高濃度抗菌素（400單位/mL）甚至加入適量的兩性霉素B或10%達(dá)克寧液的培養(yǎng)液內(nèi)于4℃下存放2小時(shí)以上，再用PBS洗2~3次，以確保所取材料無(wú)菌。要用無(wú)菌包裝的器皿或事先消毒好的帶少許培養(yǎng)液（內(nèi)含400單位/mL抗菌素）的小瓶等便于攜帶的物品來(lái)取材，所取材料應(yīng)避免接觸有毒有害的化學(xué)物質(zhì)，如碘、汞等。

　?。?）取材和原代細(xì)胞制作時(shí)，要用鋒利的器械，如手術(shù)刀或剃須刀片切碎組織，盡可能減少對(duì)細(xì)胞的機(jī)械損傷。