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影響哺乳動物原代細胞復蘇的因素包括：（a）細胞類型，（b）生長階段，（c）細胞處于細胞周期的哪個階段，（d）終懸液中的細胞數量和濃度。可通過優化以上因素來提高復蘇細胞活力， 另外，還需考慮凍存保護劑的特性以及凍存過程的具體操作。
哺乳動物細胞培養對其他細胞和微生物的污染特別敏感，例如 Hela 細胞。由于這種特性，初始細胞系可通過同工酶分析、染色體組型分析、免疫分析或基因組分析，檢測來源。凍存前后均應該進行如上檢測。特別需要注意的是，病毒和支原體污染。 一套完整健全的哺乳動物細胞系鑒定程序應該包括，檢查是否存在細菌、真菌、病毒、支原體、甚至原生生物原代細胞的污染。
哺乳動物細胞準備凍存時，需要將細胞調整到合適生長狀態， 確保既能得到足夠的復蘇細胞又無大量非必需生長的細胞。對大部分哺乳動物細胞來說，*起始細胞數為 106-107/ml 左右。為方便加入等體積的凍存保護劑（2× 凍存保護劑 + 培養基），細胞懸液濃度應以起始濃度的兩倍準備。或者，也可將沉淀細胞重懸在凍存 保護劑（1× 凍存保護劑 + 培養基）中達到預期細胞數。細胞操作應該溫和小心，確保原代細胞在凍存前是健康的。盡量避免劇烈吹打及 高速離心。適當情況下，可注入 5% 或 10% CO2 來調節 pH。
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