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人Ⅱ型肺泡上皮細胞永生化細胞專用培養基步驟：
細胞復蘇?：
從液氮罐中取出凍存細胞，迅速放入37℃水浴中解凍。
解凍后，將細胞轉移到含有新鮮培養基的培養皿中，輕輕搖動使細胞均勻分布。
放入37℃、5%CO2的培養箱中培養。
?細胞換液?：
吸除或倒掉培養皿內的舊培養液。
加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細胞，以去除懸浮在細胞表面的碎片，重復幾次。
加入新的培養基。
?細胞傳代?：
當細胞長到80%~90%時，進行傳代。
吸除或倒掉瓶內舊培養液，加入PBS緩沖液漂洗。
加入消化液，輕輕搖動使消化液流遍所有細胞表面。
將培養瓶放入37℃培養箱中靜止幾分鐘，觀察細胞變化。當細胞間隙增大后，加入含有血清的培養液終止消化。
吹打細胞使其成為懸液，轉移到離心管中離心。
棄上清，加入適量的細胞培養液重懸細胞。
按比例分裝到新的培養皿中，補加新鮮培養基。
做好標記，放入37℃、5%CO2的培養箱中培養。
?細胞凍存?：
選擇對數生長期的細胞進行凍存。
將細胞轉移到離心管中離心，棄上清。
加入適量的凍存液（如90%的培養基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細胞。
將細胞轉移到冷凍保存管中，標記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時后或過夜轉至液氮罐保存。
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