植物細(xì)胞培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基的組成對植物細(xì)胞的生長和代謝物質(zhì)的影響極大。典型的培養(yǎng)基有Murashige-Skoog(MS),Linsmaier-Skoog(LS)，white和B5等四種。

無機(jī)鹽類：在無機(jī)鹽中，磷酸根及氮源(NH4+或N03-)的含量對細(xì)胞的生長與物質(zhì)有明顯的影響。另外，一些金屬離子如Ca2+、Cu2+、 Mg2+等的含量往往也有重要影響。---碳源：通常使用2―3%的蔗糖作碳源，也有使用葡萄糖或果糖。使用單糖的優(yōu)點(diǎn)是方便分析測定，且有助于細(xì)胞生長動力學(xué)分析。

植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)：植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對植物細(xì)胞的生長和代謝物質(zhì)的影響十分大。它可分為兩大類：植物生長素類有2，4―D(二氯苯氧基乙酸)、IAA(吲哚基醋酸)、NAA(萘乙酸)等，細(xì)胞激動素類有BA(芐基腺凜吟)、動力精和玉米素。

其他因素：植物細(xì)胞培養(yǎng)的影響因素還有培養(yǎng)系統(tǒng)內(nèi)氣相組成(CO2和乙烯含量)、前體物質(zhì)、氨基酸、維生素及誘導(dǎo)劑等。

培養(yǎng)條件

溫度：培養(yǎng)溫度對植物細(xì)胞生長及二次代謝產(chǎn)物生成有重要影響。通常，植物細(xì)胞培養(yǎng)采用25℃。

攪拌：在搖瓶實(shí)驗(yàn)中，通常搖床的轉(zhuǎn)速取90―120r/min。

pH值：通過細(xì)胞膜進(jìn)行的H+離子傳遞對細(xì)胞的生育環(huán)境、生理活性來說無疑是重要的。在培養(yǎng)過程中，通常pH作為一個重要參數(shù)被控制在一定范圍內(nèi)。植物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜pH值一般為5―6。

通氣：通氣是細(xì)胞液體深層培養(yǎng)重要的物理化學(xué)因子。好氣培養(yǎng)系統(tǒng)的通氣與混合及攪拌是相互關(guān)聯(lián)的。對搖瓶試驗(yàn)，通常500m1的三角瓶內(nèi)裝80―200m1的植物細(xì)胞培養(yǎng)液較適宜。當(dāng)然，氣液傳質(zhì)還與瓶塞的材料有關(guān)。試驗(yàn)表明，從溶氧速率考慮，以棉花塞，微孔硅橡膠塞次之，鋁箔塞zui差。

光：光對植物有著特殊的作用。光照射條件不僅通過光照周期、光的質(zhì)量(即種類、波長)而且通過光照量(光強(qiáng)度)的調(diào)節(jié)來影響植物細(xì)胞的生理特性和培養(yǎng)特性。研究表明，光調(diào)節(jié)著細(xì)胞中的關(guān)鍵酶的活性，有時光能大大促進(jìn)代謝產(chǎn)物的生成，有時卻起著阻害作用。

細(xì)胞齡：在培養(yǎng)過程的不同時期，細(xì)胞的生理狀況、生長與物質(zhì)能力差異顯著。而且，使用不同細(xì)胞齡的種細(xì)胞，其后代的生長與物質(zhì)狀況也會大不一樣。通常，使用處于對數(shù)生長期后期或穩(wěn)定期前期的細(xì)胞作為接種細(xì)胞較合適。

接種量：在植物細(xì)胞培養(yǎng)中，接種量也是一個影響因素。在再次培養(yǎng)中，往往取前次培養(yǎng)液的5―20%作為種液，也以接種細(xì)胞濕重為基準(zhǔn)，其接種濃度為15―50g(濕細(xì)胞)/L。由于接種量對細(xì)胞產(chǎn)率及二次代謝物質(zhì)的有一定影響，故應(yīng)根據(jù)不同的培養(yǎng)對象通過試驗(yàn)，確定其zui大接種量。