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提取外周血淋巴細胞時需要注意的事項

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如果取外周血淋巴細胞 (PBMC) 進行ELISPOT檢測,采用新鮮血液。在保證無菌操作的前提下,首先應保證取血時抗凝劑應及時充分的與血液混勻,避免血凝塊的出現。抗凝血及時提取PBMC,避免放置時間過長,室溫下避免夜。應選用分離效果好的淋巴細胞分離液,避免PBMC中混有過多其他細胞成分或雜質。

外周血出現溶血后,在使用淋巴細胞分離液分離PBMC時,溶血產生的細胞碎片、血紅素等雜質將極大可能懸浮于分離液的層面,在吸取PBMC時非常容易混入這些雜質,由于混入細胞的細胞碎片和血紅素很難清洗去除,在進行Elispot實驗時,有可能沉積在培養板底,嚴重影響細胞因子和抗體的結合,進而影響實驗結果。

使用淋巴細胞分離液,推薦使用進口淋巴細胞分離液,如:Lymphoprep,或者NycoPrep 1.077(無寡糖)。避免使用紅細胞裂解液分離淋巴細胞。

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