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429次生長于通氣培養條件下的微生物細胞，特別是細菌和酵母，表現出比生長于非通氣條件下的細胞更強的耐受冷卻和凍存傷害 的能力。T.Nei 認為，在通氣培養條件下，細胞通透性更好，且開放條件下培養細胞在冷卻過程中比非通氣條件下培養的細胞失水更快。另外，針對微生物細胞，在對數生長期后期及穩定期早期獲得的細胞表現出更強的冰凍耐受性。從生長后期和靜態培養早期收集的微生物細胞比生長早期和生長晚期的細胞表現了更強的冰凍耐受性。
一般來講，初始凍存的細胞數目越多，復蘇率越高。對于大多數細菌和酵母而言，保證約 107/ml 的細胞數才能確保足夠數量的細胞復蘇。由于這些細胞可便捷地從瓊脂培養板或斜面上收集，如果需要更大量的細胞，也可使細胞生長于液體培養基中通過離心收集，在任何一種情況下，細胞通常懸浮在包含凍存保護劑的新鮮培養基中。原生生物可以通過離心濃縮，但通常需要懸浮于使用的培養基中，之后使用等體積含凍存保護劑的新鮮培養基稀釋。
凍存材料的活力和復蘇率由凍存前后的培養和生長狀態決定?；盍κ呛饬颗囵B物生長和繁殖的一項指標。例如原生生物材料等某些材料，需經過多次傳代才能保證其穩定性。復蘇細胞數量的估算有多種方法，包括連續稀釋，平板計數或直接細胞計數。通過對比凍存前和復蘇后細胞數量的差異，可說明細胞復蘇程度 或凍存過程是否成功。
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