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原代細胞因子溶解操作方法及注意事項

時間:2017-7-19閱讀:116
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原代細胞所供應的PeproTech細胞因子中不含載體蛋白(Carrier Protein)或其他添加劑(如BSA、HAS或蔗糖等),并且通常以zui少量的鹽來進行凍干處理,因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內,形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產品后,務必在開蓋前先離心,使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底(此時能否見到白色沉淀均屬正常現象)。
1.離心:高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒,或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘。
2.溶解(Reconstitution):用去離子水或其它緩沖液(根據說明書要求進行選擇)溶解至說明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/mL,如10ug的產品,需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解)。溶解時不可振蕩,避免因化學鍵的斷裂造成蛋白失活,可加入適當的溶劑輕搖并靜置一段時間,待細胞因子*溶解后使用。溶劑的選擇:
1)要求用去離子水溶解的產品,務必不可用鹽溶液,避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出;
2) 要求用鹽溶液溶解的產品,請依照說明書上的濃度,同樣也是為了避免過高的鹽濃度。
3.分裝和貯存(Aliquot and Storage):蛋白溶解后可根據自己的實驗需要進一步稀釋成工作液,稀釋可用RPMI 1640、DMEM或PBS等溶液,其中含有5-10%的FCS (小牛或胎牛血清)或0.5 %的BSA(牛血清白蛋白)來穩定蛋白。工作液在4℃可保存1周,如需長期保存,則需分裝凍存于-20℃ (注意:不可凍存于-80℃)。分裝時每管中工作液的體積是一次實驗的用量,以實現每次實驗用完一只工作液,原代細胞避免反復凍融引起蛋白活性的降低。
ELISA Kit for C-Type Natriuretic Peptide (CNP)    C-型鈉尿肽(CNP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)    進口、國產    規格:    48T/96T    
ELISA Kit for Pepsin (PP)    胃蛋白酶(PP)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)    進口、國產    規格:    48T/96T    
ELISA Kit for Plaet Derived Growth Factor BB (PDGFBB)    血小板衍生生長因子BB(PDGFBB)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)    進口、國產    規格:    48T/96T    
ELISA Kit for Plaet Derived Growth Factor Subunit B (PDGFB)    血小板衍生生長因子B(PDGFB)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)    進口、國產    規格:    48T/96T    
ELISA Kit for Surfactant Associated Protein J (SPJ)    表面活性物質關聯蛋白J(SPJ)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)    進口、國產    規格:    48T/96T    
ELISA Kit for Nucleoporin 50kDa (NUP50)    50kDa核孔蛋白(NUP50)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)    進口、國產    規格:    48T/96T    
ELISA Kit for Myosin Light Chain 2, Regulatory, Cardiac (MYL2)    肌球蛋白輕鏈2(MYL2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)    進口、國產    規格:    48T/96T    
ELISA Kit for Anti-Methylglyoxal Antibody (AMA)    抗甲基乙二醛抗體(AMA)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)    進口、國產    規格:    48T/96T    
ELISA Kit for Actinin Alpha 3 (ACTN3)    輔肌動蛋白α3(ACTN3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法)    進口、國產    規格:    48T/96T
原代細胞    

 

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