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IHC、ELISA和WB區別

閱讀:3194      發布時間:2018-3-9
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 免疫學三大工具,IHC、Western blot、ELISA,分別用于定位,定性和定量!
IHC(免疫組化)
是融合了免疫學原理(抗原抗體特異性結合)和組織學技術(組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等),通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色,來對組織(細胞)內抗原進行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細胞或組織,要在顯微鏡下觀察結果,可能出現膜陽性、質陽性和核陽性。
 
ELISA(酶聯免疫吸附試驗) 
用到了免疫學原理和化學反應顯色,待測的樣品多是血清、血漿、尿液、細胞或組織培養上清液,因而沒有用到組織包埋、切片等技術,這是與免疫組化的主要區別,操作上開始需要將抗原或抗體結合到固相載體表面,從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復合物粘附在載體上,這就是“吸附”的含義。
 
免疫組化和elisa所用到的原理大致相同,只是因為所檢測的樣品不同,從而在操作方法上有所不同。elisa多用于定量分析,其靈敏度非常高。
 
Western bolt (蛋白質印跡法)
先要進行SDS-PAGE,然后將分離開的蛋白質樣品用電轉儀轉移到固相載體上,而后利用抗原-抗體-標記物顯色來檢測樣品,可以用于定性和半定量。
 
【1】.對于IHC來說,定位是免疫組化zui大的優勢
該方法可在組織和細胞中進行抗原的準確定位, 因而可同時對不同抗原在同一組織或細胞中進行定位觀察,這樣就可以進行形態與功能相結合的研究,相比于其他蛋白檢測方法,免疫組化具有定位較直接準確、定性靈敏度高,是定位檢測分析方法對病理學領域開展深入研究是十分有意義,尤其對于有些因子的轉位研究十分有用。
 
【2】WB與IHC技術相比,定量可能更加準確
當然WB也可定性和定位(通過提取膜蛋白或核蛋白、胞漿蛋白分別檢測其中抗原含量,進而間接反映它們的定位),但敏感性遠遠低于IHC。
 
【3】ELISA與IHC相比,定量zui準確,是分泌性蛋白檢測方法之一。
尤其對于微定量分析多個樣本非常有用,所用試劑和樣品量很少,結果。IHC針對性比較強,而且一般是以組織或者細胞為樣本,而ELISA一般是使用血清或者組織磨碎液。免疫組化可以快速檢測樣本中抗體的陽性或者陰性,一般不用于定量檢測。
 
【4】WB和ELISA的區別
     western blotting:可以看到特異性的條帶,但是定量比較煩
 
     ELISA:可以直接讀出濃度,但是如果抗體有非特異性結合,那得到的數值就不可信。
 
     WB:只能半定量,但是可以檢測細胞膜蛋白,這點elisa做不到
 
     ELISA:可用定量方法檢測蛋白,也就是說可以觀察不同濃度刺激物對目的蛋白的影響 
 
     WB:所檢測的一般是抗原,而elisa抗原抗體都可以檢測。

     WB:所檢測的抗原可以知道其分子量的大小,或是否是多聚體、降解產物等,一句話,WB可以確定所用抗體是與哪種蛋白起作用的;而elisa無能為力,一鍋端了。
 
     WB:所適用的一抗一般是線性位點的,elisa線性或構象型抗體都可以使用。從另一個意義上講,WB可以做抗體是線性位點還是構象型位點的補充判定,而elisa不行。
 
     WB:一次處理量就是一塊膠版,10-20個樣品zui多了。elisa一塊96孔板一次可以處理96個樣本,可以設置多個復孔、對照、梯度樣等來提高檢測的可信度。
     
     WB:操作常見的非特異性條帶,膜本底差,顯色不好等等缺點在elisa上表現得要好得多。
 

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