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mRNA疫苗研究明星爆品——牛痘病毒加帽酶

閱讀:1724      發布時間:2021-12-10
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真核生物中mRNA經轉錄后修飾在5′端形成一個特殊結構,即帽子結構,該結構對 mRNA的穩定、轉運與翻譯過程均有較重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子結構的有效酶,其由D1和D12兩個亞基組成,兼具RNA三磷酸酯酶活性、鳥苷酰基轉移酶活性和鳥嘌呤 甲基轉移酶活性,可將7-甲基鳥嘌呤帽結構(m7Gppp)連接到RNA的5′末端(m7Gppp5′N)。使用酶促反應為RNA加帽是一種簡單有效的方法,能顯著提高體外轉錄的RNA的穩定性和翻譯能力。的摻入,合成與T7啟動子下游的模板DNA互補的RNA。

產品特點:
本產品在合適濃度的加帽緩沖液(Capping buffer),鳥苷三磷酸(GTP),S-腺苷甲硫氨酸(SAM)等存在條件下,能夠在一個小時之內對RNA進行加帽,效率可達到100%,并且保證加帽方向正確。

質量保證:

1、SDS-PAGE膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶,毛細管電泳檢測純度在95%以上;
2、酶動力學實時熒光法顯示無DNA酶及RNA酶污染;
3、光度測定法顯示內毒素含量≤10 EU/mg。

產品用途:

1、可應用于體內/體外翻譯前mRNA的加帽反應;
2、可應用于mRNA的5’末端標記反應。

純度驗證


RNA酶殘留定量檢測


RFU值RFU平均值CV%Ratio
VCE A28469 2858028524.50.27521.76
VCE B79995 78605793001.23944.88
VCE absin17845 1790617875.50.24131.1

應用實例
【加帽反應】

適用于10µgRNA (>I00nt)的加用反應,反應體系20µL,且可根據實際需要放大。
1.取10µgRNA,用 RNase free water將適量 RNA稀釋 至15µL;
2.將RNA置于65℃加熱5min,結束后冰上放置5 min;
3.按照表格依次加入各組分;
4.37℃反應30 min.
5.RNA加帽完成,可進行后續實驗. 

組分體積
Denatured RNA15µL
10x Capping Reaction Buffer2µL
GTP(l0 mM)1µL
SAM (2 mM)1µL
Vaccinia Capping Enzyme (10 U/µL)1µL
Total volume20µL

應用實例
【5′末端標記反應】

本步驟適用于5′末端帶有三磷酸的RNA標記,且可根據實驗需要放大。其標記效率受反應體系中RNA與 GTP摩爾濃度比以及RNA樣本中GTP含量影響。
1.用RNase Free Water將適量RNA稀釋至 14µL;
2.將RNA置于65℃加熱5 min,結束后冰上放置5 min;
3.按照表格依次加入各組分:
4.37℃孵育30 min;
5.RNA5′端標記完成,可進行后續實驗。
*注:GTPMix為GTP和少量標記物,GTP儲液應稀釋為反應體系中mRNA摩爾濃度的1-3倍。 

組分體積
Denatured RNA14 µL
IOx Capping Reaction Buffer2µL
GTP Mix2µL
SAM (2 mM)1µL
Vaccinia Capping Enzyme (10 U/µL)1µL
Total volume20µL


產品信息

貨號名稱規格
abs60152牛痘病毒加帽酶500U/2000U/10000U


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abs60156N1-Methyl-Pseudo-UTP10ul/50ul/1ml

 

Absin特色產品線(全部現貨):
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