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你知道細胞裂解有哪些方式嗎

閱讀:4541      發布時間:2022-11-4
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  細胞裂解是改變細胞通透性和活性的重要實驗方法。主要分為化學法和機械法,前者比較溫和,后者雖然產量高,但反應更劇烈,很有可能造成細胞中的DNA斷裂。
  這兩種方法(包括SDS 和溶菌酶處理等)提取純化DNA中常用的方法。機械裂解可以更均一的裂解細胞,同化學裂解相比,機械處理具有更高的裂解效率和更低的選擇性。機械處理可以更劇烈和全面的裂解細胞,但也會造成DNA 的斷裂。
  一、機械裂解法主要有以下兩種:
  1.  熱休克,既反復凍溶法,是一種常用的機械裂解方式比,通常由冷凍和解凍兩部分組成。原理:由于細胞內冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細胞結構破碎。冷凍通常在液氮或-20 ℃冰上進行,解凍可以在37、50、65 或100 ℃水浴中進熱休克比化學裂解溫和,但是很有效,有資料表明用熱休克和溶菌酶與SDS的方法獲得了90%的細胞裂解率。
  2.  超聲波處理既利用超聲加熱的方法,把細胞破碎。但這種處理會導致DNA 的斷裂,所以加熱不宜過劇烈,要設定好超聲時間和間隙時間,一般超聲時間不超過5秒,間隙時間最好大于超聲時間,這些都有利于保護酶的活性。
  二、 化學裂解和酶裂解法(在提核酸時聯合使用)
  主要是裂解液處理法,細胞裂解液的主要目的有以下幾種:
  (1)利用去污劑破壞脂質雙分子層,破裂細胞;
  (2)溶解蛋白;
  (3)蛋白變性使其穩定;
  (4)抑制蛋白酶活性。
  主要根據不同的目的,裂解液的組成有所不同,主要有提取核酸和蛋白兩中。在提取RNA或DNA時,我們主要是要充分裂解細胞,得到更多的核酸;如果我們的目的是蛋白,那要根據蛋白的位置、特性等因素考慮裂解液,在提取蛋白后,再根據實驗需要復性蛋白等。

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