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細胞培養小分子藥物配制方法解析

閱讀:1995      發布時間:2023-3-27
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科研實驗中我們經常需要配制各種濃度的試劑。例如細胞實驗一般需要加入小分子激動劑/抑制劑;分子轉化實驗一般會加入抗生素;免疫實驗需要加入免疫刺激物/免疫佐劑等。這些昂貴的試劑濃度一旦計算錯誤,不僅挑燈夜戰得來的數據毀于一旦,早日發文的愿望也隨之破滅,可謂一失足成千古恨。今天小愛就為大家解決這一難題,讓我們學會快速換算試劑濃度,擺脫科研失誤。


案例一

抑制劑儲存液配制



我們買來的小分子抑制劑一般是凍干粉,需要把它配制成溶液。首先,我們應該知道藥物的分子量、溶解度以及規格。如果是毫克級小包裝,一般不需要稱量分裝,直接在原瓶中溶解配成儲存液。

以ROCK抑制劑Y-27632為例,產品信息如下:

CAS號

規格

分子量

 可溶性/溶解性

146986-50-7

5mg

247.34

DMSO:≥ 32mg/mL (129.38mM)


該藥物推薦溶劑DMSO,同時,最大只能配成129.38mM的儲存液。這一點非常重要。有些人沒有注意藥物溶解性,直接在非水溶性藥物中加入PBS配置,結果藥物不溶,“損失慘重"。


假如我們需要配置10mM儲存液,計算公式如下:

  質量(mg)= 濃度(mM)x 體積(L)x 分子量  (1)
5(mg)= 10(mM)x ?(L)x 247.34


即向含5mg Y-27632的原瓶中加入2.02mL DMSO,即可配制成10mM溶液。(注:此處要預估原瓶的容量,如果原瓶容量小于2 mL,應考慮配置更大濃度的儲存液,如20mM,加入1.01 mL DMSO)。

此外,我們也會經常遇到質量濃度和摩爾濃度單位轉換,同樣以10mM Y-27632為例:

10mM=10mmol/L,化合物分子量為247.34,即247.34g/mol=247.34mg/mmol

10mmol/L x 247.34mg/mmol = 2473.4mg/L= 2.4734mg/mL

即10mM Y-27632溶液相當于2.4734mg/mL

濃度快速換算法則

1)mM轉換mg/mL,摩爾濃度數值乘以分子量再除以1000;


2)mg/mL轉換mM,質量濃度數值除以分子量再乘以1000。


案例二

抑制劑儲存液稀釋


我們買來抑制劑的凍干粉,配制儲存液的濃度為10mM,如果需要使用終濃度為25uM進行細胞實驗,需要加入多少抑制劑儲存液呢?記住下面這個稀釋公式就可以了:

起始濃度 x 起始體積 = 最終濃度 x 最終體積

  C1(mM) x V1(mL)= C2(mM)x V2(mL) (2)

首先,

注意單位,我們假設最終體積為2mL,代入公式:

10(mM)x V1(mL)= 0.025(mM)x 2(mL)




即我們需要吸取5uL的儲存液進行實驗操作。


案例三

百分比濃度換算



我們在使用二硫蘇糖醇(DTT)做實驗時,會遇到這樣的問題:已發表的文獻中使用0.1%的DTT溶液,而你購買的DTT為1mol/L的儲存液,那么這該如何換算呢?請聽小愛為您解答:

DTT的分子量為154,即154g/mol,儲存液換算成質量濃度C1為

154g/mol x 1mol/L = 154g/L




假設需配制1L的0.1%DTT溶液,即V2 = 1L = 1000mL

0.1% DTT溶液為0.1g/100mL = 1g/1000mL = 1g/L,即C2 = 1g/L

再使用公式(2)C1 x V1 = C2 x V2 可得:

154(g/L)x V1(L)= 1(g/L)x 1(L)



V1 = 6.5mL,即吸取6.5mL 1mol/L的DTT儲存液,加入993.5mL稀釋液中即可獲得0.1%的DTT溶液。

如果我們購買的是固體二硫蘇糖醇,配制0.1%的DTT溶液方法如下:精確稱取1g二硫蘇糖醇,用水定容至1000mL即可。


DL-二硫蘇糖醇科普

DL-二硫蘇糖醇(DL-Dithiothreitol,DTT)具有很強的還原性,其還原性很大程度上是由于其氧化狀態六元環(含二硫鍵)的構象穩定性。DTT有抗氧化作用,它能保護酶分子上的還原性基團,維持還原性環境,穩定酶的活性。DTT中還含有一定RNA酶抑制劑,具有抑制RNA酶活性的作用。具有巰基乙醇相似的作用,但DTT的刺激性氣味要小很多,毒性也比巰基乙醇低很多。用作蛋白質巰基保護劑和蛋白質二硫鍵的裂解和順序分析。

DL-二硫蘇糖醇應用:

※ 作為牛奶中主要過敏原αs1-酪蛋白的還原和烷基化反應物之一;

※ 作為精子去膜和再激活培養基的一個組分;

※ 因硫醇可有效保護生物催化劑的活性位點而維持酶的穩定性;

※ 作為還原劑用于測試N-乙基馬來酰亞胺與巰基反應的特異性。


產品信息:

貨號

產品名稱

規格

貨期

abs9226

DTT溶液(1mol/L)

5mL

現貨

abs47002083

DL-二硫蘇糖醇(>98%,BR級)

5g/25g

現貨

abs42017588

DL-二硫蘇糖醇(>97%)

1g/5g

現貨


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貨號

產品名稱

規格

貨期

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Brefeldin A

10mg/25mg

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50mg/100mg/200mg

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5mg/50mg

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LY 294002

10mg/25mg/100mg

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Y-27632

5mg/10mg/50mg

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10mg/50mg

1-2周

abs810008

SP600125

10mg/50mg

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5mg/10mg/50mg/100mg

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5mg/25mg

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SB-431542

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溫馨提示:Absin所有產品僅用于科學研究,請勿藥物、家用或其他用途。

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