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大鼠極低密度脂蛋白（VLDL）elisa試劑盒實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠極低密度脂蛋白（VLDL）水平。用純化的大

鼠極低密度脂蛋白（VLDL）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入

極低密度脂蛋白（VLDL），再與HRP標(biāo)記的極低密度脂蛋白（VLDL）抗體結(jié)合，形成抗體-

抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成

藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的極低密度脂蛋白（VLDL）

呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠

極低密度脂蛋白（VLDL）濃度。

試劑盒組成

120倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液3ml×1瓶

2酶標(biāo)試劑3ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（240µg/ml）0.5ml×1瓶

3酶標(biāo)包被板12孔×4條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶

4樣品稀釋液3ml×1瓶10說明書1份

5顯色劑A液3ml×1瓶11封板膜2張

6顯色劑B液3ml×1/瓶12密封袋1個

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

大鼠極低密度脂蛋白（VLDL）elisa試劑盒操作步驟

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

120µg/ml5號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

60µg/ml4號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

30µg/ml3號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

15µg/ml2號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

7.5µg/ml1號標(biāo)準(zhǔn)品150µl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、

待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，

然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此

重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50µl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10分鐘.

10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.大鼠極低密度脂蛋白（VLDL）elisa試劑盒測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止

液后15分鐘以內(nèi)進行。