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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
| 大鼠微血管周細胞 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | GOY-01X1247 |
商品介紹：
名稱 大鼠微血管周細胞 2.組織來源：微血管組織 3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶 4.細胞簡介： 大鼠微血管周細胞分離自微血管組織；周細胞（pericyte）又稱Rouget細胞和壁細胞，是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內皮細胞的細胞，可以收縮。周細胞嵌入毛細血管內皮細胞的基膜中，通過物理接觸和旁分泌信號與內皮細胞進行細胞通訊，監視和穩定內皮細胞的成熟過程。此外，周細胞還具有調控毛細血管血流量、細胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用，其多功能性是目前研究的熱點之一，所以對血管周細胞的生物學特征、標記物、細胞功能等的研究都為相關研究提供基礎資料。周細胞產生手指狀的外延以調控毛細血管的血流量。周細胞和內皮細胞之間共同擁有一個基膜，基膜上有多種細胞連接，包括多種整合素、神經鈣黏素、纖連蛋白以及接合素。它還參與毛細血管直徑的雙向調控；毛細血管受損時，周細胞還可增殖，分化為內皮細胞和成纖維細胞。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠血管周細胞采用膠原酶-中性蛋白酶聯合消化法及不銹鋼網篩過濾法結合密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的大鼠微血管周細胞經alpha-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml） 培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-R187 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態成纖維細胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
MAGI1 / CNKSR3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
MRPL44 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
VTI1A 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
B3GALT5 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
Citrate synthase / CS 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
IL17 / IL17A CHO細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
ROR1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 OLR1 / LOX1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
狗 CD40L / CD154 / TNFSF5 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠微血管周細胞外致密纖維尾部蛋白4抗體Anti-ACE Antibody小鼠趨化因子elisa檢測試劑盒品牌
2'-5'-寡腺苷酸合成2抗體Anti-ACAA2 Antibody(原貨號PB1075)小鼠B因子elisa檢測試劑盒品牌
µ-型受體抗體Anti-ACACB Antibody小鼠腫瘤壞死因子αelisa檢測試劑盒
化D型受體抗體Anti-ACADS/SCAD Antibody小鼠內皮抑素elisa檢測試劑盒品牌
含氧酸輔A轉移1抗體Anti-ACADVL Antibody大鼠胱天蛋白9elisa檢測試劑盒說明書
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