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干細胞的軟瓊脂集落培養實驗
閱讀：618 發布時間：2018-3-22干細胞實驗方法原理
HL-60細胞是一種急性早幼粒細胞白血病細胞，在體外無需加刺激因子，可在軟瓊脂培養基中形成集落。二甲基亞砜是一種細胞分化誘導劑，經二甲基亞砜處理后的HL-60細胞按粒系途徑定向成熟分化，同時細胞的增殖力降低，幾乎全部細胞喪失了軟瓊脂中形成集落的能力。因此，這種方法可用于細胞分化的基礎研究和臨床腫瘤治療的療效檢驗等方面。
實驗材料
HL-60細胞
試劑、試劑盒
小牛血清 RPMI1640培養液 臺盼蘭 瓊脂 二甲基亞砜
儀器、耗材
超凈工作臺 二氧化碳培養箱 顯微鏡 培養瓶 吸管 酒精燈 血細胞計數板 多孔培養板
實驗步驟
1. 收集對數生長期的HL-60細胞，先按實驗十三測定細胞活力，然后調整細胞濃度，制成300~1 000活細胞/ml 的細胞懸液。
2. 取二個培養瓶每個瓶中加9 ml 調整好濃度的細胞懸液，然后各加入1 ml 3%瓊脂（已融化，在65℃水浴中放置），迅速加入，混勻。
3. 用微量加樣器吸140 μl 二甲基亞砜（MDSO），加到一個瓶中，充分混勻，為實驗組，另一瓶不加DMSO，為空白對照組。
4. 取一個16 mm 多孔培養板，每孔加1 ml（35 mm 培養皿需加2 ml）細胞瓊脂懸液，勿有氣泡，將實驗組和對照組分兩組加好，蓋上蓋并作好標記。
5. 在室溫放置20分鐘使細胞瓊脂懸液凝固。
6. 然后移培養板或平皿于CO2培養箱中37℃進行培養。
7. 培養7~10天，肉眼觀察并計數細胞集落。
8. 結果：以肉眼可見的細胞團（含500個以上細胞）作為計數集落的標準。對照組HL-60細胞在含0.3%的軟瓊脂培養基中生長良好，每個孔中可見有多個集落形成，而實驗組HL-60細胞因經二甲基亞砜誘導分化，細胞在軟瓊脂中的集落形成明顯減少。
9. 干細胞集落的計數和計算：
（1）集落數=n孔中細胞集落數總和/n孔
（2）集落形成率=集落數/接種培養細胞總數×100%
Cladribine Related Compound A 克拉曲濱相關物質A標準品 24757-70-8 20mg
西替利嗪相關物質A標準品 246870-46-2 20mg
Doxazosin Related Compound C 多沙唑嗪相關雜質C標準品 23680-84-4 20mg
依法韋侖相關物質A標準品 209414-27-7 20mg
左沙丁胺醇鹽酸鹽相關物質B標準品 18910-68-4 20mg
Abacavir Sulfate Racemic 外消旋阿巴卡韋標準品 188062-50-2 20mg
Actein 黃肉楠堿標準品 18642-44-9 20mg
左沙丁胺醇鹽酸鹽相關物質G標準品 182676-90-0 20mg
外消旋依法韋侖標準品 177530-93-7 20mg
Dofetilide Related Compound A 多非利特相關物質A標準品 176447-94-2 20mg
干細胞