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人elisa試劑盒實驗縮小誤差的8個要點
閱讀：906 發(fā)布時間：2019-1-25人elisa試劑盒的基本原理是抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水 性部分相互吸附，并保持其免疫學活性； 抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學 和酶學活性； 酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反 應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結(jié)果。
在人elisa試劑盒測定中試劑的準備*為關(guān)鍵的是，在實驗開始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20min以上后，再進行測定，以使人elisa試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的，主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達到所要求的高度，以滿足測定要求。
通常我們做一個實驗，出現(xiàn)誤差是難免的，我們所要做到的是如何縮小誤差的產(chǎn)生，在操作的過程中，我們除了需要多點細心之外，還有一些需要重點注意的地方，今天的文章中，elisa試劑盒的技術(shù)人員為您總結(jié)出人elisa試劑盒實驗縮小誤差的8個要點：
一：檢驗技
應(yīng)具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。能熟練操作實驗儀器、器械，具有一定總結(jié)和分析問題的能力，對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。
二：使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準確與否對定量檢測尤為重要。
三：仔細閱讀說明書
嚴格按照人elisa試劑盒說明書要求進行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用。值得改進的地方，反復(fù)試驗確定成立后才能改進。
四：洗滌*
洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。洗滌液要新鮮，現(xiàn)用現(xiàn)配，陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)假陽性。
五：嚴控反應(yīng)時間
反應(yīng)時間過長，酶失活；反應(yīng)時間過短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
六：注意人elisa試劑盒保存期，過保存期的試劑不能使用。
七：評估試劑的實用性
試劑的穩(wěn)定與否，對準確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應(yīng)進行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗，判定人elisa試劑盒符合要求后方可使用。
八：嚴格掌握顯色時間
顯色時間過短，加入終止液反應(yīng)終止后，底物結(jié)合物的量過少，易出現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色，應(yīng)判為假陽性，這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色，不可報陽性，這可能是本底顯色的結(jié)果。