商品介紹:
LY2801653dihydrochloride是一種II型ATP競爭性的MET抑制劑,Ki值為2nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1206801-37-7 別名:Merestinib dihydrochloride 純度:99.59% 分子量:625.45 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
根瘤菌Escherichia coli大鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)
巴氏醋桿菌Escherichia coli大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)
大腸埃希氏菌Escherichia coli大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)
鏈霉菌Escherichia coli大鼠堿性磷(ALP)
麥根腐平臍蠕孢Escherichia coli大鼠堿性磷(ALP)
嗜熱雙歧桿菌好熱嗜亞種Escherichia coli大鼠血管生成4(ANG-4)
球毛殼Escherichia coli大鼠血管生成4(ANG-4)
喜溫?zé)o氧芽孢桿菌Escherichia coli大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)
大腸埃希氏菌Escherichia coli大鼠脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)
豬丹絲菌Escherichia coli大鼠乙脫氫(ADH)
豬丹絲菌Escherichia coli大鼠乙脫氫(ADH)
短小克銀漢霉Escherichia coli大鼠乙脫氫(ALDH)
CytosporaEscherichia coli大鼠乙脫氫(ALDH)
枯草芽孢桿菌Escherichia coli大鼠可溶性CD14(sCD14)
栗疫菌Escherichia coli大鼠可溶性CD14(sCD14)
意大青霉Escherichia coli大鼠繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激(MIS/AMH)
脂滴包被蛋白Perilipin-A抗體香干酪孔菌絨鼠皮膚成纖維樣細胞
多聚腺苷結(jié)合蛋白抗體香榧嗜藍孢孔菌白牦牛皮膚細胞
髓鞘轉(zhuǎn)錄因子1激抗體炭生褐褶菌獼猴皮膚細胞
磷甲羥戊激抗體無殼異擔(dān)子菌果子貍皮膚成纖維樣細胞
MET抑制劑(LY2801653 dihydrochloride)腐皮殼 1,8-二羥基蒽醌
榆黃蘑 羅漢果皂苷ⅡA2
斑玉蕈 羅漢果皂苷ⅢA1
飼料類芽孢桿 靈芝酸A
腸膜明串珠 異-羅漢果皂苷 V
萎蔫短小桿 羅漢果皂苷IVa
扁平鏈霉 白頭翁皂苷D
松口蘑 白頭翁皂苷B
羅丹塞伯林德納氏酵母 3-O-β-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李糖(1→2)]- a-L-阿伯糖 常春藤配基
馬鞍山紅桿 3-O-糖( 1→4)-[ a -L-鼠李糖(1→2)]- a-L-阿伯糖 23-羥基羽扇豆20(
減蛋綜合征病 3-O-β-D-葡萄糖( 1→3)- a -L-鼠李糖(1→2)- a-L-阿伯糖 齊墩果酸– 2
Barrientosiimonas Hederacolchiside E
玫瑰色考克氏 苦蘇花皂苷C
栗疫 hederagenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-(β-D-gluc
蘇云金芽孢桿 Lup-20(29)-en-28-oic acid, 3-[β-D-glucopyranosyl(1