公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:p97ATPase抑制劑(ML241 hydrochloride)
英文名稱:ML241 hydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
ML241鹽酸鹽是有效的選擇性p97ATPase抑制劑,IC50值為100nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 純度:99.98% 分子量:408.92 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
大腸埃希氏菌人血栓A2Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β干擾(IFN-β/IFNB)
平田頭菇6-1人血紅蛋白HBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)
黑曲霉人血紅蛋白CBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)
彩色豆馬勃人纖維蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)
球形芽孢桿菌人血纖肽/纖維蛋白肽BBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)
簇囊腐霉人纖溶原激活劑Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)
廣布擬盤多毛孢人膜表面免疫球蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)
弗雷曲霉人前白蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)
靈芝(紅芝, 赤芝)人硫肝糖蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)
邊緣假單胞菌人冷球蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠16α羥基雌1(16-α OHE-1)
變形桿菌*人紅膜蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠16α羥基雌1(16-α OHE-1)
黑管菌人高鐵血紅蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α1性糖蛋白(α1-AGP)
黑曲霉人低分子肝Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠α1性糖蛋白(α1-AGP)
球孢白僵菌人補(bǔ)體3裂解產(chǎn)物Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成3(eNOS-3)
深紅酵母人補(bǔ)體片段3b受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成3(eNOS-3)
釀酒酵母人補(bǔ)體1抑制物抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)
鋅指/環(huán)指蛋白2抗體泡囊側(cè)耳馬鐵菊頭蝠肺細(xì)胞
鋅指蛋白3/環(huán)指蛋白3抗體小牛肝菌小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(HNP抗性)
鋅指蛋白230抗體紫丁香蘑EB病毒感染的人外周淋巴細(xì)胞
E3泛蛋白連接ZSWIM2抗體大球蓋菇抗鼠CD4單克細(xì)胞
p97ATPase抑制劑(ML241 hydrochloride)大腸埃希 甲砜霉
松口蘑 克霉
沉積物馬杜放線屬 左
大米 鎘 鹽酸吉西他濱
橙色紅曲 吉西他濱
鉆特省芽孢桿 桔霉
果生鏈核盤
墳?zāi)构?jié)桿 2-氨基-4-噻唑乙酸
粗毛云芝 6-氨基青霉酸
香菇 白楊
裂褶 賀普丁
釀酒酵母 維帕米鹽酸鹽
尖鐮孢古巴專化型 莫西沙星
雞傷寒沙門氏 莫西沙星鹽酸鹽
產(chǎn)氣氣桿 米呋啶