詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
GDC-0077 | 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg | 1~3天 |
商品介紹:
注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! CAS號:2060571-02-8 純度:99.07% 分子量:407.37 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養液,將細胞輕輕吹打下來,轉移到離心管內,500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內檢測)。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),FITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環。
豇豆慢生根瘤菌Pseudomonas aeruginosa大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)
花楸盤多毛孢Pseudomonas aeruginosa大鼠抗平滑肌抗體(ASMA)
靈芝(紅芝,赤芝)Pseudomonas aeruginosa大鼠抗平滑肌抗體(ASMA)
氏針層孔菌Pseudomonas aeruginosa大鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)
釀酒酵母Pseudomonas aeruginosa大鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)
腸沙門氏菌腸亞種邁阿密血清型Pseudomonas aeruginosa大鼠纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物(TAFI)
產紅青霉Pseudomonas aeruginosa大鼠纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物(TAFI)
基簡馬杜放線菌Pseudomonas aeruginosa大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)
尿腸球菌Pseudomonas aeruginosa大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)
褐紅小孔菌Pseudomonas aeruginosa大鼠游離脂肪(FFA)
蘇云金芽孢桿菌蠟螟亞種Pseudomonas aeruginosa大鼠游離脂肪(FFA)
平菇Pseudomonas aeruginosa大鼠血小板反應蛋白/凝血敏感蛋白1(TSP-1)
托姆青霉Pseudomonas aeruginosa大鼠血小板反應蛋白/凝血敏感蛋白1(TSP-1)
豌豆根瘤菌Pseudomonas aeruginosa大鼠骨粘連蛋白(ON)
黑曲霉Pseudomonas aeruginosa大鼠骨粘連蛋白(ON)
玉米乳桿菌Pseudomonas aeruginosa大鼠葉(FA)
P2Y1受體抗體/受體抗體極細鏈格孢人誘導型多能干細胞(iPS細胞)DYR0100(干細胞庫保藏)
腺苷環化激活肽-38抗體裂擬迷孔菌大鼠骨髓MSC間充質干細胞(干細胞庫保藏)
蛋白活化受體4抗體外皮毛霉小鼠胚胎肌母細胞(2014年新引進)(未分化,可誘導分化形成肌纖維)(干細胞庫保藏)
p21激活激4抗體星形擬盤多毛孢人類胚胎干細胞H1(干細胞庫保藏)
PI3K抑制劑(GDC-0077)泡盛曲霉 伊紅藍瓊脂(EMB)
根瘤 伽升沃 D
鏈霉 兩性電解質
灰樹花* 伽升沃 C
膠質芽孢桿 羥基磷灰石
香菇 鉤吻甲
水棲黃桿 乳糖膽鹽發酵培養基
斑點氣單胞 化銫
核果黑腐皮殼 鉤吻子
曲霉屬 疏水硅烷
馬賽 葫蘆E
巴氏醋桿 親和硅烷
松口蘑 乳糖復發酵培養基
釀酒酵母 分離液
假交替單胞 通關藤苷H