商品介紹:
CCT137690是Aurora抑制劑,對Aurora A,Aurora C和Aurora B的IC50分別為15,19和25nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1095382-05-0 純度:98.33% 分子量:551.48 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
隱花青鵝膏人二氧化Bacillus cereus小鼠溶菌(LZM)
枯草芽孢桿菌人環(huán)加氧2Bacillus cereus小鼠可溶性CD30(sCD30)
蠟狀芽孢桿菌人周期依賴性激5Bacillus cereus小鼠可溶性CD30(sCD30)
楊樹細(xì)盾霉人激肽釋放10Bacillus cereus小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)
腫痂鏈霉菌人磷酯Cγ鏈Bacillus cereus小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)
德爾布有孢酵母人神經(jīng)Bacillus cereus小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)
釀酒酵母人磷酯酰肌特異性磷酯CBacillus cereus小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)
谷棒桿菌Ⅳ型人磷酯CBacillus cereus小鼠粘蛋白/粘液5AC(MUC5AC)
釀酒酵母人酪激2Bacillus cereus小鼠粘蛋白/粘液5AC(MUC5AC)
白絨紅蛋巢菌人白介1β轉(zhuǎn)換Bacillus cereus小鼠血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)
枯草芽孢桿菌人整合連接激1Bacillus cereus小鼠血管緊張轉(zhuǎn)化(ACE)
乳桿菌屬人色P450c21B/21-羥化Bacillus cereus小鼠血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)
草木樨中華根瘤菌人末端脫氧核苷轉(zhuǎn)移Bacillus cereus小鼠血管緊張Ⅱ(ANG-Ⅱ)
黃曲霉人2,3-雙加氧Bacillus cereus小鼠角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)
金黃色葡萄球菌人絲蛋白Bacillus cereus小鼠角化內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)
擬莖點(diǎn)霉人脾臟酪激Bacillus cereus小鼠活化A(ACV-A)
端粒哈爾體蛋白抗體菠蘿泛生氏菌猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞
WBP2蛋白抗體#蘇云金芽孢桿菌急性髓系細(xì)胞白血病細(xì)胞
Wolfram綜合征蛋白1抗體姬松茸Abm-1人急性髓性白血病細(xì)胞
信號通路Wnt16抗體小白菇(疊生)人整合SV40基因的乳腺上皮細(xì)胞
Aurora抑制劑(CCT 137690)大腸埃希氏 鈣黃綠二鈉鹽
鈣黃綠
暗金黃擔(dān)子
芽胞桿 二甲橙四鈉
炭黑曲霉 黑芥子硫苷酸一水
枯草芽孢桿 二甲橙
北假交替單胞 黃腐
Botryosphaeria obtusa 鄰甲絡(luò)合劑
豬丹絲 華蟾它靈
樺褶孔 槲皮-3-O-β-D-葡糖糖-7-O-β-D-龍膽雙糖苷
果產(chǎn)核盤孢 鄰甲
總狀毛霉原變型 胡薄荷酮
粘質(zhì)沙雷氏 紅花八角
瘤黑粘座孢霉 紫脲酸
米根霉 紅松內(nèi)酯